收到细胞后应如何去正确的处理:
您需要准备好细胞所要用到的培养基和相关试剂,虽然所有的贴壁,半贴壁或者悬浮细胞处理方式差不多,但是不同的实验室培养条件和处理力度还有试剂的批间差这些问题存在,也会导致对细胞处理不当,或者环境的不适应而造成细胞的死亡。收到细胞后,正确的处理步骤至关重要。首先,将运输箱静置于培养室30分钟,使细胞逐渐适应温度变化。随后,在生物安全柜中打开包装,用75%酒精喷洒消毒外表面,注意避免酒精渗入培养瓶造成污染。
对于贴壁细胞,需轻柔地将培养瓶直立放置,使培养基完全覆盖细胞层。显微镜下观察细胞状态后,弃去旧培养基,加入2-3ml预热的PBS缓冲液轻柔洗涤。特别注意首次传代时保留原培养基50%,与新鲜培养基1:1混合使用,这能显著降低环境突变带来的应激反应。
悬浮细胞处理则需采用差异离心法:800rpm离心5分钟后,保留适量上清作为"条件培养基"。研究发现,添加15%条件培养基能维持细胞分泌的自分泌因子,这对原代肿瘤细胞系尤为重要。冻存管复苏的细胞建议首次换液时添加10μM Y-27632(ROCK抑制剂),可提高细胞贴壁率38%。