AlwI
产品介绍
- 在 rCutSmart™ 缓冲液中具有 100% 活性(超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液),便于进行双酶切
- IIS 型限制性内切酶能识别非回文 DNA 序列,并在识别序列之外进行切割
- 限制性内切酶酶切位点:GGATC(4/5)
产品来源
大肠杆菌菌株,携带有克隆自洛菲不动杆菌( Acinetobacter lwoffii)(R. Morgan)的 AlwI 基因。
- 特性和用法
单位定义
一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中,37℃ 下,1 小时内酶切 1 µg λ DNA(dam-)所需的酶量。
反应条件
1X rCutSmart™ 缓冲液
Incubate at 37℃ 1X rCutSmart™ 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25℃)
在不同缓冲液中的活性
NEBuffer™ r1.1: 50%
NEBuffer™ r2.1: 50%
NEBuffer™ r3.1: 10% rCutSmart™ Buffer: 100%稀释兼容性 贮存溶液
10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
200 µg/ml BSA
50% Glycerol
pH 7.4 @ 25℃ 热失活
否
甲基化敏感性 dam 甲基化: 阻断酶切 dcm 甲基化: 不敏感
CpG甲基化: 不敏感 同裂酶 AclWI BinI+ BspPI
- 注意事项
- AlwI 切割产生的 DNA 片段含有单碱基突出的 5´ 末端,它比平末端更难连接。
- dam 甲基化阻断该酶酶切。如需了解更多信息,请参阅 Dam-Dcm 和 CpG 甲基化。
- 对于不能热失活的酶,我们建议进行柱纯化(如 Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒),或琼脂糖凝胶电泳后切胶回收(建议使用 Monarch DNA 胶回收试剂盒),或酚/氯仿抽提。
- 延长酶切时间、高浓度酶或 >5% 的甘油浓度可能产生星号活性
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