BsaXI
产品介绍
- 在 rCutSmart™ 缓冲液中具有 100% 活性(超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液),便于进行双酶切
- 酶切位点:(9/12)ACNNNNNCTCC(10/7)
产品来源
嗜热脂肪芽孢杆菌( Bacillus stearothermophilus)25B(Z. Chen)
- 特性和用法
单位定义
一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中,37℃ 条件下,1 小时内酶切 1 µg λ DNA 所需的酶量。
反应条件
1X rCutSmart™ 缓冲液
Incubate at 37℃ 1X rCutSmart™ 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25℃)
在不同缓冲液中的活性
NEBuffer™ r1.1: 50%
NEBuffer™ r2.1: 100%
NEBuffer™ r3.1: 10% rCutSmart™ Buffer: 100%稀释兼容性 贮存溶液
10 mM Tris-HCl
500 mM NaCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% Glycerol
0.1% Triton® X-100
pH 7.6 @ 25℃ 热失活
否
甲基化敏感性 dam 甲基化: 不敏感 dcm 甲基化: 不敏感
CpG甲基化: 不敏感 - 注意事项
- BsaXI 切割 DNA 底物两次,切下其识别位点后产生一个27 碱基对的片段,该片段包含 5 个碱基的 3' 突出端。
- 由于 BsaXI 与 DNA 结合,建议在 16 小时的温育过程中添加不超过 2 个单位的酶量。
- 在 NEBuffer r1.1 和 NEBuffer r2.1 缓冲液中可能出现星号活性。
- 对于不能热失活的酶,我们建议进行柱纯化(如 Monarch® PCR & DNA 纯化试剂盒),或琼脂糖凝胶电泳后切胶回收(建议使用 Monarch DNA 胶回收试剂盒),或酚/氯仿抽提。
- 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化不敏感
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