- 在 rCutSmart™ 缓冲液中具有 100% 活性(超过 210 种内切酶兼容于此缓冲液),便于进行双酶切
- 酶切位点 ACN/GT
产品来源
大肠杆菌菌株,携带有克隆自幽门螺杆菌(
Helicobacter pylori)CH4(S.A. Thompson)的 HpyCH4III 基因。
- 特性和用法
单位定义
一个单位是指在 50 µl 的总反应体系中,在 37℃ 下,1 小时内酶切 1 µg λ DNA 所需的酶量。
反应条件
1X rCutSmart™ 缓冲液
Incubate at 37℃
1X rCutSmart™ 缓冲液
50 mM Potassium Acetate
20 mM Tris-acetate
10 mM Magnesium Acetate
100 µg/ml Recombinant Albumin
(pH 7.9 @ 25℃)
在不同缓冲液中的活性
NEBuffer™ r1.1: 100%
NEBuffer™ r2.1: 25%
NEBuffer™ r3.1: <10%
rCutSmart™ Buffer: 100%稀释兼容性
贮存溶液
10 mM Tris-HCl
100 mM NaCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
200 µg/ml Recombinant Albumin
50% Glycerol
pH 7.4 @ 25℃
热失活
65℃ for 20 minutes
甲基化敏感性
dam 甲基化: 不敏感
dcm 甲基化: 不敏感
CpG甲基化: 不敏感
同裂酶
Bst4CI
TaaI
Tsp4CI+
- 注意事项
- Bst4CI 是 HpyCH4III 的同裂酶。
- HpyCH4III 切割产生的 DNA 片段含有难以连接的单碱基 3´ 突出末端。
- 建议消化每 µg DNA 的酶量不 > 5.0 units,温育时间不 > 4 小时。
- 对 CpG、dcm 或 dam 甲基化均不敏感。