1、试剂配制及保存

缓冲液：取1包缓冲剂加1000mL蒸馏水或纯净水，搅拌溶解制成磷酸缓冲液，室温保存。

显色剂：取1瓶显色剂加25mL缓冲液溶解，使用时取50μL，4℃冰箱保存。

底 物：取1瓶底物加10mL蒸馏水或纯净水溶解，使用时取50μL，4℃冰箱保存。

胆碱酯酶：酶制剂（丁酰胆碱酯酶）无需配制，直接取用50μL，4℃冰箱保存。

2、样品提取

取2g果蔬样品（块茎类取4g）剪成1cm左右见方碎片，放入小烧杯（或取样瓶）中；加入20mL缓冲液，振荡1～2min，倒出提取液，静置2min待测。

3、测试

对照测试：于专用反应瓶中加入3mL缓冲液，再分别加入50μL显色剂和酶液，混匀，37℃下放置30 min后加入50μL底物，摇匀并立即倒入比色杯中，放入测试通道，按仪器“对照”键测试3min的吸光度变化值ΔΑ0 .

样品测试：于专用反应瓶中加入3mL待测样品液，再分别加入50μL显色剂和酶液，混匀，37℃下放置30 min后加入50μL底物，摇匀并立即倒入比色杯中，放入测试通道，按仪器“样品”键，测试3min的吸光度变化值ΔΑt .

结果判定：

◇ 以分光光度计测试时，按以下表达式计算出抑制率：

抑制率(%)=[(ΔΑ0－ΔΑt )/ΔΑ0]×100

◇ 以农残检测仪检测时其抑制率一般可自动计算。若样品抑制率≥70%，表示被测果蔬农残超标，为阳性结果。阳性结果的样品需做2次以上重复检测，多次检测仍呈阳性需用气相色谱等仪器做进一步确认。

操作提示：在加底物的环节中，可预先将底物加入比色杯，待静置时间一到，马上将反应瓶中的反应液倒入已经加有底物的比色杯，并迅速放入测试通道进行测试。这样可以减少同时检测多个样品时因加底物时间过长而造成的误差。

4、注意事项

酶活性要求：本试剂盒中酶试剂正常活性ΔA0=0.4～0.8，符合NY/T 448-2001方法的要求。

保存：试剂盒应保存于4℃冰箱，保质期12个月。

使用：任何试剂使用时，用一瓶打开一瓶，用完后才使用新的，防止变质。

器具专用原则：任何用于移液的器具和容器都应各自贴上标签，单独使用，以免交叉污染。

试剂只出不入原则：测试时，从任何试剂瓶吸出的试剂，禁止再次注射回试剂瓶。

环境温度对测试的影响：当环境温度过低时（一般低于20℃），测试时需作必要保温措施。