支原体污染PCR检测试剂盒

PCR Detection Kit for Mycoplasma Contamination

支原体污染PCR检测试剂盒，用于检测细胞培养中的支原体污染，可检测属于柔膜菌纲(Mollicutes)的支原体、脲原体、无胆甾支原体、螺原体、虫原体、中间原体等超过一百种，与柔膜菌纲以外的其他微生物没有特异性反应。

支原体是一种直径约为0.1-0.3 μm、无细胞壁的原核生物，具有变形能力，属于柔膜菌纲，常被用作柔膜菌纲的统称。支原体是最小的具有完整细胞结构的生物，可透过常见过滤膜（0.22-0.45 μm），因此常规的无菌过滤方法不能将其去除，靶向细胞壁的抗生素也对支原体无效。支原体种类繁多，通常为寄生性或腐生性，有些种类可作为正常共生菌存在，有些种类具有致病性，还有一些种类具有细胞侵入性。

支原体污染是基础研究和工业生产中一个很常见的问题，据报导，有5-35%的细胞株受到污染；一些实验室由于对此不够重视，实际上可能有高达80%以上的细胞株发生支原体污染。支原体在光学显微镜下不可见，对培养基的需求有限，一般不会引起培养物混浊，因此细胞被支原体污染一般难以察觉。支原体污染能消耗营养物，促进代谢积累，导致pH改变，诱导或抑制细胞因子表达，并改变培养细胞的代谢、增殖特征及形态。由于支原体污染能影响几乎每一个细胞参数，所以很多研究都强调常规检测正在培养的细胞，以确保观察到的结果不被支原体污染所损害。

目前已知的支原体种类约200种，污染细胞培养物的支原体种类有20多种。其中95%的污染是由五种支原体引起：精氨酸支原体（Mycoplasma arginini），发酵支原体（Mycoplasma fermentans），猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis），口腔支原体（Mycoplasma orale）和莱氏无胆甾原体（Acholeplasma laidlawii）。精氨酸支原体和莱氏无胆甾原体为牛源性，主要由牛血清带入；猪鼻支原体主要由胰酶（通常来源于猪）带入；发酵支原体和口腔支原体为人源性，主要由实验操作人员带入，人源性的支原体污染还包括唾液支原体和人型支原体。原代细胞的支原体污染占比不到1%，但是种类最多，已知有17种支原体，主要为鼠、禽和犬来源的支原体，如鸡毒支原体（Mycoplasma gallisepticum）、关节炎支原体（Mycoplasma arthritidis）、肺支原体（Mycoplasma pulmonis）、犬支原体（Mycoplasma canis）等，一般是从原始的动物组织中带入进来，因此种类比较多，并且有不确定性。欧洲药典（EUROPEAN PHARMACOPOEIA）2.6.7指定了六种需检测的支原体：莱氏无胆甾原体，鸡毒支原体，猪鼻支原体，口腔支原体，肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae）和滑液支原体（Mycoplasma synoviae）。由上述内容可知，引起细胞污染的支原体种类较为繁杂，并且可能存在未知种类，因此使用支原体通用性PCR引物更适合检测支原体污染的需要，可以避免使用物种特异性引物可能导致的漏检情况。

目前美国、欧洲、日本的药典仍然推荐体外培养法作为检测支原体污染的金标准。培养法通过使用选择性培养基，可以达到很强的特异性，并且有很高的灵敏度，但是其缺点在于操作比较繁琐，且耗时较长，完成一个完整的检测需28天之久。对于大多数实验而言，这是一个不可承受的时间成本。PCR检测由于其特异性强、灵敏度高，且快速的特点，成为培养法的良好替代方案，正逐渐被世界各国所接受。

本试剂盒采用支原体通用性引物，可检测上述提及的全部支原体，最低检测极限（LOD，100%检出时的最低模板浓度）为反应液中10个支原体基因组，能在2到3小时内获得可靠的结果，是一种灵敏度高、特异性强、快速的检测支原体污染的方法，具有以下特点： ①特异性引物是针对高度保守的支原体16S rRNA序列设计的，可用于检测非常广泛的支原体种类，不受真核细胞或细菌DNA干扰。经本试剂盒测试的支原体菌株涵盖了所有常见的支原体污染种类； ②灵敏度极高，最低检测极限仅需10个拷贝的支原体基因组； ③阳性对照所用引物与支原体检测相同，可帮助判断假阴性现象，避免假阴性导致的误判； ④包含PCR反应所需的所有成分，只需进行一次PCR反应，降低了交叉污染的几率，使用方便。

由于支原体污染比较隐蔽，所以建议给细胞定期做支原体检测，以免在未察觉的情况下给您的实验造成影响。可供参考的做法是：在新细胞进入实验室时，以及细胞冻存入库前，都应该做一下支原体检测，平时每三个月常规检测一次。

如发现支原体污染，可用我公司的支原体清除剂进行清除。支原体清除剂采用双重杀菌机制，不易耐药。

本产品仅供科学研究使用。