线粒体呼吸链复合物V，通常称为ATP合成酶（ATP synthase）、F型ATP酶（F type ATPase）和F1F0ATP酶（F1F0ATPase），是线粒体氧化磷酸化的**反应。。其分子量为500KD，含有十六个亚单位，其中两 个：ATP酶6和8为线粒体DNA编码的。ATP酶主要有朗格结构域：F0为质子通道，由几个膜蛋白构成，包括a、b、c、d、e、F6、A6L、 OSCP（oligomycin sensitive conferring protein）等；和F1催化活性结构域，由水溶性的α3β3γδε蛋白构成。其最特征性的酶活性是寡霉素敏感的ATP合成酶。复合物V的主要功能在于 产生大部分细胞所需要的能量ATP。ATP的合成需要线粒体内膜电子传递到氧分子时，呼吸链蛋白所产生的质子梯度变化。质子通过F0结构域传递到基质，激 活F1催化活性结构域，促使ATP合成。该酶异常会导致心肌和神经系统疾病。

检测原理;
       基于ATP，在寡霉素参与下，受到F1F0 ATP酶的水解，进而通过丙酮酸激酶（pyruvate kinase；PK）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase；LDH）反应系统中，还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（reduced nicotinamide adeninedinucleotide；NADH）转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide；NAD），产生的吸光峰值的变化（340nm），来定量分析F1F0 ATP酶活性。

试剂组成：（20 管/10 样)）
       缓冲液（Reagent A） 20 毫升
       反应液（Reagent B） 2.5 毫升
       阴性液（Reagent C） 2 毫升
       底物液（Reagent D） 500 微升
       专性液（Reagent E） 250 微升
       产品说明书 1 份

保存方式
       -20°C冰箱避光保存，避免反复冻融；反应液（Reagent B）避免光照，有效保证 6 月。

用户自备
       比色皿：用于比色分析的容器
       双波长分光光度仪：用于比色分析
       培养箱：用于孵育反应物

实验步骤
      （一）、背景对照测定
1、移取 780 微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液（Reagent B）
3、加入 20 微升底物液（Reagent D）
4、放进 30°C培养箱里静置 3 分钟
5、加入 100 微升阴性液（Reagent C）
6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
7、即刻放进分光光度仪检测，此为背景空对照：
340 波长读数 0 分钟 －340 波长读数 1 分钟或 5 分钟
     （二）、样品总活性测定
1、移取 780 微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液（Reagent B）
3、加入 20 微升底物液（Reagent D）
4、放进 30°C培养箱里静置 3 分钟
5、加入 100 微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）
6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
7、即刻放进分光光度仪检测，此为样品总活性读数：
340 波长读数 0 分钟 －340 波长读数 1 分钟或 5 分钟
      （三）、样品非特异活性测定
      实验开始前，移取 100 微升待测样品（注意：10微克总线粒体蛋白）到 1.5毫升离心管，加入 20 微升专性液（Reagent E），混匀后，放进 30°C培养箱里孵育 15 分钟。然后置于冰槽里备用.
1、移取 760 微升缓冲液（Reagent A）到新的比色皿
2、加入 100 微升反应液（Reagent B）
3、加入 20 微升底物液（Reagent D）
4、放进 30°C培养箱里静置 3 分钟
5、加入 120 微升上述预处理的待测样品
6、上下倾倒数次，混匀（限定在 3 秒之内）
7、即刻放进分光光度仪检测，此为样品非特异活性读数：
340 波长读数 0 分钟 －340 波长读数 1 分钟或 5 分钟