测定原理:
在Rubisco的催化下,1分子的核酮糖-1,5-二磷酸(RuBP)与1分子的CO2结合,产生2分子的3-磷酸甘油酸(PGA),PGA 可通过外加的 3-磷酸甘油酸激酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶的作用,产生甘油醛-3-磷酸,并使还原型辅酶I(NADH)氧化。因此,340nm吸光度的变化可计算还原型辅酶I氧化速率,还原型辅酶I氧化速率可反映 Rubisco 的活性。
自备的仪器和用品:
可见-紫外分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1ml 石英比色皿、研钵、冰、蒸馏水。
试剂的组成和配制(25 管/24 样):
提取液一:液体 25ml×1 瓶,4°C保存;
提取液二:液体 25ml×1 瓶,4°C保存;
试剂一:30ml×1 瓶,4°C保存;
试剂二:粉剂×1 瓶,-20°C保存,临用前加入 12.5ml 试剂一,充分混匀备用,用不完的试剂分装后-20°C保存,禁止反复冻融;
试剂三:粉剂×1 瓶,-20°C保存,临用前加入 12.5ml 试剂一,充分混匀备用,用不完的试剂分装后-20°C保存,禁止反复冻融;
试剂四:粉剂×1 瓶,-20°C保存,临用前加入 1.25ml 试剂一,充分混匀备用,用不完的试剂分装后-20°C保存,禁止反复冻融;