Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）是植物体内脯氨酸生物合成的关键酶，同时也是植物在遭受胁迫时脯氨酸合成的限速酶；脯氨酸作为一种渗透调节物质，与植物对干旱和盐胁迫的适应性密切相关。所以 P5CS 在调节脯氨酸的代谢水平上具有重要作用。

检测原理:
       Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）催化谷氨酸转化成γ-谷氨酸半醛，同时使 NADP+还原成 NADPH，通过检测 NADPH 在 340nm 处的增加速率，即可得出 P5CS 酶活性大小。

试剂盒组成和配制：
提取液: 液体 30mL×1瓶 ,4°C保存
试剂一: 粉体1支 ,4°C保存, 临用前甩几下，使粉体落到底部，再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用。
试剂二: 粉体 2支, -20°C保存,临用前甩几下，使粉体落到底部，每支分别加入 0.6mL 蒸馏水溶解备用，用不完的试剂分装后-20°C保存，禁止反复冻融，三天内用完。
试剂三: 液体 26mL×1 瓶, 4°C保存
试剂四 :粉体 1支 ,4°C保存, 临用前甩几下，使粉体落到底部，再加入 1.1mL 蒸馏水溶解备用。

所需的仪器和用品：
       紫外分光光度计、1mL 石英比色皿（光径 1cm）、水浴锅、离心机、可调式移液器、研钵、冰和蒸馏水。

Δ1-吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS）活性测定：
建议正式实验前选取 2 个样本做预测定，了解本批样本情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费.
1、 样本制备：
① 组织样本：
取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液，冰浴匀浆，12000rpm，4°C离心 10min，取上清液待用。
【注】：若增加样本量，可按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例进行提取
② 细菌/细胞样本：
先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约 500 万细菌或细胞加入 1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；12000rpm 4°C离心 10min，取上清，置冰上待测。
【注】：若增加样本量，可按照细菌/细胞数量（104）：提取液（mL）为 500~1000：1 的比例进行提取。
③ 液体样本：澄清的液体样本直接检测，若浑浊则离心后取上清检测。
2、 上机检测：
1 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2 所有试剂解冻至室温（25°C）。
3 在 1mL 石英比色皿中依次加入：

       混匀，室温（25°C）下，30s 时立即于 340nm 处分别读取吸光 值 A1，10min 后
读取 A2，△A=（A1-A2）测定-（A1-A2）对照  , （每个样本需做一个自身对照）。

【注】
      1.若ΔA 的值在零附近徘徊，则可延长反应时间 T（如增至 30min 或更长），或加大
样本量 V1（如增至 180μL，则试剂三相应减少），则改变后的反应（孵育）时间 T 或加
样体 积 V1 需代入计算公式重新计算。
      2.若起始值 A1 太大如超过 2（如颜色较深的植物叶片，一般色素较高，则起始值相对
会偏高），可以适当减少样本加样量（则试剂三相应增加），则改变后的加样体积需代
入计算公式重新计算。  

计算公式: