SOD(EC 1.15.1.1)是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H₂O₂和O₂。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H₂O₂主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O₂^-)，O₂^-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O₂^-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

1.试剂二：使用前先离心再吹打混匀。

2.试剂五：临用前将试剂四加入试剂五中，并震荡溶解。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1ml玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)

1.细菌或培养细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量(104个)：提取液体积(ml)为500-1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1ml提取液)，超声波破碎细菌或细胞(冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次)，8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2.组织样本：按照组织质量(g)：提取液体积(ml)为1:5-10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液)，进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3.血清(浆)样本：直接检测。

二、测定步驟

1.分光光度计预热30min以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。

2.测定前将试剂一、三和五37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴5min以上。

3.样本测定(在EP管中加入下列试剂)

充分混匀，37℃水浴30min后，置于1ml玻璃比色皿测定560nm下的吸光度，分别记为A测定、A对照、A1空白、A2空白，计算ΔA测定=A测定-A对照，ΔA空白=A1空白-A2空白。如底部有沉淀，混匀后再行测定。 (空白管1和空白管2各只需做1～2管，每个样本有一个对照管)

三、SOD活性计算

1.抑制百分率的计算：

抑制百分率=(ΔA空白-ΔA测定)÷ΔA空白× 100%

尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内，越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。

2.SOD酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系中的SOD酶活力定义为一个酶活力单位。

3.SOD酶活性计算：

(1)血清(浆)SOD活性(U/ml)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷V样×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F

(2)组织、细菌或培养细胞SOD活力计算：

A按样本蛋白浓度计算SOD活性 (U/mg prot)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(V样×Cpr)×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷Cpr×F

B按样本质量计算SOD活性(U/g质量)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V反总]÷(W×V样÷V样总)×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)÷W×F

C按细菌或细胞数量计算 SOD活力(U/10⁴cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V反总]÷(500×V样÷V样总)×F=0.0228×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F

V反总：反应体系总体积，1.026ml；V样：加入反应体系中样本的体积，0.09ml；V样总：加入提取液体积，1ml；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500万，F：样本稀释倍数。

注意事项：

1.样本和试剂二使用时在冰上放置。

2.样本较多时，可按表格配制工作液(包含试剂一、二、三)，试剂五必须最后加入。

3.反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。