胆固醇(Cholesterol)又称胆甾醇，是一种环戊烷多氢菲的衍生物，广泛存在于动物体内，其中脑、神经组织最丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也较高，用酶学方法测定游离胆固醇(FC)是生化检测中的常用方法，其特点是：1、灵敏度、准确度、精密度均高；2、使用温和的反应条件；3、操作简便；4、适用于自动分析仪。

游离胆固醇(FC)检测试剂盒(COD-PAP双试剂比色法)又称胆固醇氧化酶法或胆固醇氧化酶-过氧化物酶偶联法等，血液中的胆固醇约 1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯，后者被胆固醇酯酶(CEH)水解为游离胆固醇，游离胆固醇被胆固醇氧化酶(COD)氧化成胆甾烯酮，并产生过氧化氢，再经过氧化物酶(POD)催化，使 4-氨基安替比林与酚(三者合称 PAP)反应，生成红色醌亚胺色素(Trinder反应)，当 CEH不存在时胆固醇酯不能被水解，因而只能检测到游离胆固醇的含量，分光光度计在 500～520nm处进行比色测定，盒用于定量测定人或动物的血清、血浆、脑脊液、细胞、组织等样本中的游离胆固醇含量。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1、生理盐水或 PBS

2、离心管、小试管或 96孔板

3、水浴锅或恒温箱

4、分光光度计或酶标仪

5、全自动或半自动生化分析仪

操作步骤(仅供参考)：

1、样本处理：

①血清、血浆、脑脊液样本：从待测样本中分离出的血清或血浆不应有溶血，直接检测，如超过线性范围，用生理盐水稀释后检测。

②细胞样本：

a.取适量的细胞(一般推荐>106以上)，1000g离心 10min，弃上清，留取沉淀。

b.用 PBS或生理盐水清洗 1～2次，1000g离心 10min，弃上清，留取沉淀。

c.加入 200～300μl的 PBS或生理盐水匀浆，冰浴条件下超声破碎细胞，功率 300W，每次3～5s，间隔 30s，重复 3～5次；亦可手动匀浆，制备好的匀浆液不可离心；亦可用 1～2% Triton X-100冰浴 30～60min，制备好的裂解液不可离心。

③组织样本：准确称取适量组织样本，按质量(g)：生理盐水或 PBS(ml)=1：9的比例，加入生理盐水或 PBS，冰浴条件下手动或机械匀浆，2500～3000g离心 10min，取上清。

2、 FC测定

①各种仪器按上表依次加入试剂。充分混匀, 37℃水浴中孵育 5min。

②立即用相应仪器测定 500～520nm吸光度，以空白孔(管)调零，读取标准孔(管)、测定孔(管)的吸光度，分别记为 A标准、A测定。

机器参数：

计算公式：

血清、血浆等液体样本(空白调零)：

FC(mmol/L)= A测定/A标准×5

血清、血浆等液体样本(全自动生化分析仪)：

FC(mmol/L)= (A测定- A空白)/(A标准- A空白)×5

组织样本(空白调零)：

FC(mmol/g)= A测定/A标准×5×V2/(m×1000)

组织样本(全自动生化分析仪)：

FC(mmol/g)= (A测定- A空白)/(A标准- A空白)×5×V/(m×1000)

细胞样本(空白调零)：

FC(mmol/L)= A测定/A标准×5×V2/V1

细胞样本(全自动生化分析仪)：

FC(mmol/L)= (A测定- A空白)/(A标准- A空白)×5×V2/V1

式中：

m=组织样本取样量(g)

V1=细胞样本取样量(ml)

V2=样本匀浆液总体积(ml)

参考区间：

【FC标准(5mmol/L)=442.48mg/dl】

健康成年人理想范围：<1.7mmol/L(<67mg/dl)

性能指标：

注意事项：

1、上述低温试剂避免反复冻融，以免失效或效率下降。

2、 COD-PAP工作液如不经常使用，应充分溶解后分装-20℃保存，可 4℃短期保存。

3、本法可直接用于检测脑脊液中的 FC含量，但不能直接检测尿液中的 FC含量，因为未经处理的尿液中含有还原性物质，影响过氧化物酶反应。

4、检测 FC的血清或血浆宜用 EDTA或肝素抗凝，如不能及时测定，密闭保存，4℃可稳定 1周，-20℃可以稳定半年以上。

5、本法线性范围可达 13mmol/L，如果样本 FC浓度过高，结果可能呈假性降低，应用生理盐水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

6、该试剂盒既可作终点法检测，又可作速率法检测。

7、本法不适于检测总胆固醇的浓度，如需检测总胆固醇(TC)含量，请选择相关产品。

有效期：6个月有效；4℃运输，-20℃保存。