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甘油三酯(TG)检测试剂盒(分溶抽提比色法)
甘油三酯(TG)检测试剂盒(分溶抽提比色法)图片
产品介绍

   甘油三酯(Triglyceride,TG)又称三酰甘油或三油酸甘油酯,是三分子长链脂肪酸和一分子甘油形成的脂肪分子,是人体内含量最多的脂类,大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量,同时肝脏、脂肪等组织还可以进行甘油三酯的合成。目前,检测甘油三脂的常用方法有酶法和化学法。酶法测定具有简便、快捷、微量且试剂稳定等优点,适用于手工和自动化测定。化学法是使用异丙醇等不同的有机溶剂从血清中抽提出甘油三酯,分层或者吸附去除磷脂等影响因素,再经皂化、氧化,由显色反应进行测定。目前最常用的化学法是乙酰丙酮比色法,其中包括吸附抽提法和分溶抽提法。

   甘油三酯(TG)检测试剂盒(分溶抽提比色法)其检测原理是组织匀浆液或血清中的甘油三脂经 TG抽提液处理后,甘油三脂被保留在上层,再经皂化生成甘油,后被氧化剂氧化成甲醛,甲醛与乙酰丙酮在铵根离子存在时,发生缩合反应(Hantgsch反应),生成带荧光的黄色物质即 3,5-二乙酰-1,4-双氢二甲基吡啶,用分光光度计在 420nm处进行比色测定,与相同处理的标准管对比计算其含量。本试剂盒可用于人或动物的血清、血浆、脑脊液等样本中的甘油三脂含量的测定。本方法所用试剂室温下可保存半年以上,比较稳定,在 0.25~11.44mg/ml(0.28~12.93mmol/L)之间有良好的线性关系,检测范围较宽。本产品仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成:
试剂(A):TG标准(2mg/ml)1ml4℃避光
试剂(B): TG抽提液70mlRT避光
试剂(C):酸性缓冲液6mlRT
试剂(D):皂化剂30mlRT
试剂(E): TG氧化剂30ml4℃避光
试剂(F): TG显色剂30ml4℃避光
使用说明书1份
自备材料:

1、生理盐水

2、离心机、天平、水浴锅或恒温箱

3、离心管或小试管、分光光度计、比色杯

操作步骤(仅供参考):

1、准备样品:

a)血清样品,取样后直接用于检测。

b)组织样品,准确称取适量组织样品(质量为 m),按质量(g):生理盐水  (ml)=1:4的比例,加入生理盐水,冰浴条件下手动或机械匀浆,获取匀浆液(体积为 VT),取 0.1ml匀浆液备用。

2、TG加样:按照下表设置空白管、对照管、测定管,溶液应按照顺序依次加入,并注意避免产生气泡;如果样品中的 TG含量过高,可减少样品用量或适当稀释后再进行测定。

加入物质(ml)

空白管标准管测定管
蒸馏水0.1
TG标准(2mg/ml)0.1
样品0.1
抽提液1.251.251.25
酸性缓冲液0.250.250.25
边加边摇,混匀,静置分层,取上清液
上清液0.150.150.15
皂化剂0.50.50.5
混匀,56℃水浴 5min
氧化剂0.50.50.5
显色剂0.50.50.5
混匀,56℃水浴 25min。

3、TG测定:取出离心管,流水冷却;空白管调零,比色杯光径 1cm,用分光光度计测定420nm处标准管和测定管的吸光度(A标准、A测定)。

计算:

100ml血清中含有的甘油三酯的量:

TG(mg/100ml)=( A测定/ A标准)×2×100/0.1=( A测定/ A标准)×2000

100g组织中含有的甘油三酯的量:

TG(mg/100g)=( A测定/ A标准)×2×VT/0.1×100/m=( A测定/ A标准)×2000×VT/m

样品中甘油三酯的浓度:TG(mg/ml)=( A测定/ A标准)×2

式中:A测定=测定管的吸光度

A标准=标准管的吸光度

VT=一定质量组织的匀浆液总体积(ml)

m=实际取用的组织质量(g)

TG浓度换算:1mg/ml=1.13mmol/L

参考范围:

血清 TG正常值:0.55~1.70mmol/L;临界值:2.30mmol/L;危险值:4.50mmol/L。

注意事项:

1、本法可直接用于检测脑脊液中的 TG含量和尿液中的 TG含量。

2、取血样后应及时分离,以免红细胞膜磷脂被磷脂酶水解产生游离甘油,或者抗凝剂存在时使红细胞内水溢出而稀释血浆 TG值。

3、分离血浆前,标本应放于冰水中,并尽快分离。

4、该方法的线性范围是 0.3~12mg/ml, 0.6mg/ml以上比较准确,超过 11mg/ml会有稍微偏差。因此,样品浓度超出上述范围应做相应处理。

5、显色后吸光度会随时间变化,故应及时比色,当标本过多时,可置冰箱中逐一比色。

6、皂化、氧化、显色时间和温度对显色结果及最终的吸光度均会造成影响,所以每批次测定都应同时做标准对照。

7、做血浆标本时,通常选用 1mg/ml  EDTA.2K做抗凝剂。

有效期:12个月有效。常温运输,4℃保存。
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