活化蛋白C(APC)ELISA检测试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测方法。向预包被了抗体的微孔板中，加入标准品和待测样本，温育后，加入生物素标记抗体和过氧化物酶标记的链霉亲和素。经过温育和洗涤结合形成的免疫复合物，去除未结合的酶，然后加入显色底物TMB。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子浓度呈正相关。最后，在450 nm处测定反应孔样品吸光度（OD）值，通过绘制标准曲线计算出样本待测因子的浓度。

血清、血浆、细胞培养上清液和组织等。

双抗夹心法。

APC；BTPS2；DESMD；DP2；DP2.5；DP3；GS；PPP1R46；APC regulator of WNT signaling pathway；adenomatous polyposis coli protein；APC, WNT signaling pathway regulator；WNT signaling pathway regulator；adenomatosis polyposis coli tumor suppressor；adenomatous polyposis coli (APC)；deleted in polyposis 2.5；epididymis secretory sperm binding protein；protein phosphatase 1, regulatory subunit 46；活化蛋白C(APC)

试剂盒组分

    ELISA酶标板、标准品、生物素化抗体、浓缩HRP酶结合物、酶结合物稀释液、生物素化抗体稀释液、标准品&样品稀释液、浓缩洗涤液、底物溶液(TMB)、反应终止液、封板覆膜

需自备物品

    1.酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) ；

    2.洗板机（可调注液量，保证每孔350μl洗液而不溢出）；

    3.高精度单道加液器；

    4.高精度多道加液器；

    5.37℃恒温箱；

    6.低温离心机；

    7.纯净水或蒸馏水。

操作步骤

    1.从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内封存于2-8℃；

    2.分别将标本或不同浓度的标准品加入相应孔中(100μl/孔)， 37℃孵箱孵育90分钟；

    3.弃掉板内液体，洗板2次；

    4.加入生物素化抗体工作液(100μl/孔)，37℃孵箱孵育60分钟；弃掉板内液体，洗板3次；

    5.除空白孔外，加入酶结合物工作液(100μl/孔)。37℃孵箱，避光孵育30分钟；弃掉板内液体，洗板5次

    6.加入TMB显色工作液（包括空白孔）100μl/孔，37℃孵箱，避光孵育，当标准曲线高浓度的颜色较深，有明显的颜色梯度的时候，即可终止。试验显色反应请勿超过30分钟；

    7.加入终止液（包括空白孔）100μl/孔，混匀后即刻测量OD（450nm）值(10分钟内)。

    8.计算标本待测因子含量。

注意事项

    1.试剂盒使用前请保存在2-8℃。除复溶后的标准品，其他成分不可冻结。

    2.浓缩生物素化抗体，浓缩酶结合物体积小，运输中颠簸和可能的倒置，会使液体沾到管壁或瓶盖。因此使用前请用手甩几下或1000rpm离心1分钟，以使附着管壁或瓶盖的液体沉积到管底。

    3.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，使结晶完全溶解后再配制洗涤液。

    4.实验过程中，冻干标准品为一次性使用，不得分装。因其浓度较低，溶解两小时候后，会迅速失活。

    5.操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

    6.配制试剂时，要用旋涡混合仪混匀。加入孔内的试剂，充分混匀对测试结果尤为重要，最好使用微量振荡器（使用最低频率），如无微量振荡器，可在反应前手工轻轻晃动酶标板1分钟，例如做圆周动作，使加入孔中的反应液混匀。

    7.实验用酶标仪应严格按使用说明书规范操作，并在使用前充分预热。

    8.酶免实验中标准品和样本检测时建议作复孔。

    9.将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2-8℃保存。

    10.显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

    11.超过使用有效日期的试剂盒不能应用于实验中。

    12.试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，波长应该设置为450nm和630nm.

    13.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按生物废弃物处理。终止液为2M硫酸，使用时必须注意安全。

    14.各步骤加样均应使用加样器，并经常校准其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

    15.每次试验测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔最高浓度的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数。

    16.不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

    17.以洗板机洗板时，每孔注液量不应少于350μl, 注意检查加样头是否堵塞。手工洗板时， 用带纸屑的吸水材料应慎重， 防止外源性过氧化物酶类似物或氧化还原物与显色剂发生反应。

    18.用终止液终止反应后，请于10分钟内读取OD值。

    19.进行复孔实验时，结果计算一定要求平均值。

    20.标本溶血可能会有假阳性结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

    21.试验时，应该将加过样品的板条放于密闭盒内，并保持湿度约60%左右；

    22.为保证恒温箱内的温度为37℃，恒温箱的温度要经常校准。以确保实验温度保持恒定。    

精密度

    批间差:CV%<10%；批内差:CV%<8%

储存

    -20℃,短期4℃

有效期

    12个月