结合实验

从杆状病毒表达系统纯化EGFR、ErbB-2和ErbB4的细胞内激酶结构域。EGFR、ErbB-2和ErbB-4反应在最终体积为45 μl的96孔聚苯乙烯圆底板中进行。反应混合物含有50 mM 4-吗啉基丙磺酸（pH7.5）、2 mM MnCl2、10 μM ATP、1μCi[γ-33P] ATP/反应，50 μM肽A [生物素-（氨基己酸）-EEEEYFELVAKKK-CONH2]、1 mM二硫苏糖醇和1 μl 含有连续稀释GW2016（起始浓度为10 μM）的DMSO。加入纯化的1型受体细胞内结构域引发反应。酶的量为1 pmol/反应（20 nM）。在23℃下孵育10分钟后，加入45 μl的0.5％磷酸水溶液终止反应。将终止的反应混合物（75 μl）转移到磷酸纤维素滤板上。将板过滤并用200 μl的0.5％磷酸洗涤三次。将闪烁混合物（50 μl）加入到每个孔中，通过在Packard Topcount中计数来定量测定。

细胞系

EGFR过表达细胞系HN5和A-431，ErbB-2过表达细胞系BT474、N87（20）和CaLu-3

溶解方法

该化合物在DMSO中的溶解度大于29.1 mg/mL。若获取更高浓度的溶液，可在37℃下孵育10分钟，随后在超声波浴中摇匀。-20℃以下可储存数月。

反应条件

30 μM，3天

应用

GW2016（30 μM）完全抑制HN5细胞群体的生长。GW2016（> 3.3 μM）抑制了50％的细胞生长。GW2016（0.37 μM）显著抑制了20％的生长。GW2016（1 μM）完全抑制了BT474细胞生长，0.37 μM浓度下产生约60％的生长抑制。在EGFR过表达细胞系HN5中，GW2016（1和10 μM）诱导G1停滞。GW2016（10 μM，72 h）轻微增加含有亚2N DNA含量的细胞数。在BT474细胞中，GW2016处理72小时后大幅增加具有亚2N DNA的细胞数量。

动物模型

BT474和HN5人肿瘤异种移植小鼠模型

给药剂量

口服，30和100 mg/kg，一天两次，持续21天

应用

Lapatinib (100 mg/kg) 完全抑制肿瘤生长。

注意事项

由于实验环境的不同，实际溶解度可能与理论值略有不同，请测试室内所有化合物的溶解度。

References:

[1]. Rusnak D W, Lackey K, Affleck K, et al. The effects of the novel, reversible epidermal growth factor receptor/ErbB-2 tyrosine kinase inhibitor, GW2016, on the growth of human normal and tumor-derived cell lines in vitro and in vivo[J]. Molecular cancer therapeutics, 2001, 1(2): 85-94.