体外mTOR激酶实验

在10 μL测定缓冲液 (50 mM Hepes pH 7.5, 10 mM MgCl2, 3 mM MnCl2, 1 mM EGTA, 2 mM DTT, 0.01%Tween-20) 中，反应混合物由以下成分组成：0.10 μg/mL自制mTOR酶，0.05 μM ULight-eIF4E-结合蛋白1 (Thr37/46) 和10 μM ATP。将混合物置于室温下孵育60分钟。10 μL检测混合物包括16 mM EDTA，0.004mM Eu-W1024-标记的抗磷酸化eIF4E结合蛋白1-(Thr37/46) 抗体和1 × LANCE?检测缓冲液。加入上述检测混合物，再将其孵育60分钟。

细胞系

H929细胞

制备方法

在DMSO中的溶解度大于10 mM。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。

反应条件

高达10 μM；48小时

实验结果

在多种癌细胞中，VS-5584表现出较高的抗增殖活性。其中，H929细胞（多发性骨髓瘤）对VS-5584最敏感 (IC50 = 48 nM)。

动物模型

PTENnull人前列腺PC3细胞异种移植肿瘤模型

给药剂量

11或25 mg/kg；口服给药；每日1次，持续28天

实验结果

在PTENnull人前列腺PC3细胞异种移植肿瘤模型中，11和25 mg/kg VS-5584引起显著的肿瘤生长抑制 (TGI) （分别为79%和113%）。

其它注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Hart S, Novotny-Diermayr V, Goh KC, Williams M, Tan YC, Ong LC, Cheong A, Ng BK, Amalini C, Madan B, Nagaraj H, Jayaraman R, Pasha KM, Ethirajulu K, Chng WJ, Mustafa N, Goh BC, Benes C, McDermott U, Garnett M, Dymock B, Wood JM. VS-5584, a novel and highly selective PI3K/mTOR kinase inhibitor for the treatment of cancer. Mol Cancer Ther. 2013 Feb;12(2):151-61.