增殖细胞核抗原（内参）单克隆抗体

商品属性

产品介绍
英文名称PCNA Mouse mAb, Nuclear Loading Control

中文名称增殖细胞核抗原（内参）单克隆抗体

别    名Cyclin; DNA polymerase delta auxiliary protein; HGCN8729; MGC8367; Mutagen-sensitive 209 protein; Pcna/cyclin; PCNAR; Polymerase delta accessory protein; Proliferating Cell Nuclear Antigen  

产品类型内参抗体

研究领域肿瘤  细胞生物  细胞周期蛋白  转录调节因子  细胞类型标志物  

抗体来源Mouse

克隆类型Monoclonal

克 隆 号10E9

交叉反应Human,Mouse,Rat

产品应用WB=1:5000-10000,IHC-P=1:100-500,IHC-F=1:100-500,IF=1:100-500,Flow-Cyt=1:50-200

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

理论分子量29 kDa

检测分子量

细胞定位细胞核

性    状Liquid

浓    度1mg/ml

免 疫 原KLH conjugated synthetic peptide derived from human PCNA

亚    型IgG

纯化方法affinity purified by Protein G

缓 冲 液0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

PubMedPubMed

产品介绍Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) is a 28kDa nuclear protein associated with the cell cycle, a nuclear protein vital for cellular DNA synthesis. Proliferating cell nuclear antigen was originally identified by immunofluorescence as a nuclear protein whose appearance correlated with the proliferate state of the cell. PCNA is required for replication of DNA in vitro and has been identified as the auxiliary protein (cofactor) for DNA polymerase delta. The anti-PCNA antibodies react with the nuclei of proliferating cells. PCNA is essential for cellular DNA synthesis and is also required for the in vitro replication of simian virus 40 (SV40) DNA where it acts to coordinate leading and lagging strand synthesis at the replication fork. The PCNA protein may fulfil several separate roles in the cell nucleus associated with changes in its antigenic structure.

靶点与功能

PCNA（Proliferating Cell Nuclear Antigen）是一种核内酸性蛋白（261个氨基酸，分子量约36kDa），通过形成 homotrimer 环状结构包裹DNA链，作为DNA聚合酶δ的辅助因子参与DNA复制延伸和核苷酸切除修复。其核心功能与临床意义包括：

细胞增殖标志物：仅在G1晚期至S期高表达，M期降解，是判断细胞增殖活性的“金标准”（Ki-67需与PCNA联合验证）；

肿瘤诊断：在胃癌（阳性率78%）、乳腺癌（65%）、肺癌（62%）等恶性肿瘤中高表达，与肿瘤分级、淋巴结转移正相关；

药物研发：PCNA抑制剂（如T2AA）可通过阻断DNA复制抑制肿瘤细胞增殖，抗体可用于评估药物对S期的阻滞效果。

实验操作关键要点

IHC-P肿瘤组织染色：

抗原修复：柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）微波修复20分钟（95℃），自然冷却至室温，PCNA核信号显著增强；

阳性定位：增殖活跃细胞（如肿瘤组织边缘）细胞核呈棕黄色颗粒状阳性，G1期弱表达，S期强表达，M期阴性；

定量分析：计算阳性细胞百分比（Labeling Index，LI），LI＞50%提示高增殖活性（与肿瘤预后不良相关）。

WB检测（细胞周期同步化样本）：

样本处理：HeLa细胞经胸腺嘧啶核苷（2mM）双阻断法同步至G1/S期，RIPA裂解液（含PMSF）冰上裂解20分钟；

电泳条件：12% SDS-PAGE凝胶，恒压80V浓缩胶、120V分离胶，转膜200mA恒流1小时（0.45μm PVDF膜）；

抗体孵育：一抗1:1000稀释（5% BSA+TBST），4℃孵育过夜，曝光时间30秒（36kDa处可见清晰单一条带）。

IF双标实验（DNA复制动态观察）：

与BrdU抗体共染（BrdU标记S期DNA合成），PCNA呈核内点状聚集，BrdU呈弥漫核阳性，二者共定位提示活跃的DNA复制。

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