增殖细胞核抗原单克隆抗体

商品属性

产品介绍
英文名称PCNA Mouse mAb

中文名称增殖细胞核抗原单克隆抗体

别    名Cyclin; DNA polymerase delta auxiliary protein; HGCN8729; MGC8367; Mutagen-sensitive 209 protein; Pcna/cyclin; PCNAR; Polymerase delta accessory protein; Proliferating Cell Nuclear Antigen; PCNA_HUMAN.  

研究领域肿瘤  细胞生物  免疫学  染色质和核信号  细胞周期蛋白  

抗体来源Mouse

克隆类型Monoclonal

克 隆 号2A1

交叉反应Human,Mouse,Rat

产品应用WB=1:500-2000,IHC-P=1:100-500,IHC-F=1:100-500,IF=1:100-500

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

理论分子量29 kDa

检测分子量

细胞定位细胞核

性    状Liquid

浓    度1mg/ml

免 疫 原Recombinant human PCNA Protein

亚    型IgG

纯化方法affinity purified by Protein G

缓 冲 液0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

PubMedPubMed

产品介绍Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) is a 28kDa nuclear protein associated with the cell cycle, a nuclear protein vital for cellular DNA synthesis. Proliferating cell nuclear antigen was originally identified by immunofluorescence as a nuclear protein whose appearance correlated with the proliferate state of the cell. PCNA is required for replication of DNA in vitro and has been identified as the auxiliary protein (cofactor) for DNA polymerase delta. The anti-PCNA antibodies react with the nuclei of proliferating cells. PCNA is essential for cellular DNA synthesis and is also required for the in vitro replication of simian virus 40 (SV40) DNA where it acts to coordinate leading and lagging strand synthesis at the replication fork. The PCNA protein may fulfil several separate roles in the cell nucleus associated with changes in its antigenic structure.

靶点与功能

PCNA（Proliferating Cell Nuclear Antigen）是一种高度保守的核内蛋白（36kDa），通过形成 homotrimer 结构环绕DNA链，作为DNA聚合酶δ的滑动钳（sliding clamp），参与：

DNA复制：在S期表达达峰，与cyclin D1、Ki-67共同作为细胞增殖指标（G1期低表达，S/G2/M期高表达）；

DNA修复：在核苷酸切除修复（NER）、碱基切除修复（BER）中招募修复酶（如XP-G、DNA连接酶I）；

内参特性：核内表达稳定（不受营养状态、药物处理影响），常用于WB/IF实验中核蛋白的标准化定量（与β-actin胞质内参互补）。

实验操作关键要点

WB核内参应用（标准化定量）：

核蛋白提取：使用核质分离试剂盒，胞核组分用含0.5% NP-40的RIPA裂解液提取，确保A260/A280比值1.8-2.0（核蛋白纯度）；

上样量控制：核蛋白上样量20-30μg/泳道（PCNA表达丰度高，避免信号饱和），与目的蛋白（如p53、Histone H3）同步检测；

灰度分析：用ImageJ软件计算目的蛋白条带灰度值/PCNA灰度值，消除上样误差（PCNA批内变异系数<8%，优于Histone H3）。

IHC-P增殖活性检测：

抗原修复：柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）微波修复15分钟（石蜡切片），核信号清晰；

阳性定位：增殖期细胞细胞核呈棕黄色颗粒状阳性（S期弥漫分布，G1期点状分布），Ki-67阳性细胞中PCNA阳性率>90%；

临床意义：胃癌组织PCNA指数（阳性细胞比例）>50%提示高增殖活性，与预后不良相关（HR=2.31，95%CI 1.82-2.93）。

IF双标实验（细胞周期研究）：

推荐与Cyclin E抗体共染，使用Alexa Fluor 488（绿色，PCNA）和594（红色，Cyclin E），激光共聚焦观察G1/S期转换时二者核内共定位（调控DNA复制起始）。

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