增殖细胞核抗原（核内参）重组兔单抗

商品属性

产品介绍
英文名称PCNA Recombinant Rabbit mAb, Nuclear Loading Control

中文名称增殖细胞核抗原（核内参）重组兔单抗

别    名Cyclin; DNA polymerase delta auxiliary protein; HGCN8729; MGC8367; Mutagen-sensitive 209 protein; Pcna/cyclin; PCNAR; Polymerase delta accessory protein; Proliferating Cell Nuclear Antigen; PCNA_HUMAN.  

产品类型内参抗体 重组兔单抗

研究领域肿瘤  细胞生物  染色质和核信号  细胞周期蛋白  

抗体来源Rabbit

克隆类型Recombinant

克 隆 号1G3

交叉反应Human,Mouse,Rat

产品应用WB=1:1000-20000,IHC-P=1:200-1000,IHC-F=1:200-1000,IF=1:200-1000,Flow-Cyt=1ug/Test,ICC/IF=1:100-500

not yet tested in other applications.

optimal dilutions/concentrations should be determined by the end user.

理论分子量29 kDa

检测分子量

细胞定位细胞核

性    状Liquid

浓    度1mg/ml

免 疫 原A synthesized peptide derived from human PCNA: 100-160/261

亚    型IgG

纯化方法affinity purified by Protein A

缓 冲 液0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.

保存条件Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.

注意事项This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.

PubMedPubMed

产品介绍Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) is a 28kDa nuclear protein associated with the cell cycle, a nuclear protein vital for cellular DNA synthesis. Proliferating cell nuclear antigen was originally identified by immunofluorescence as a nuclear protein whose appearance correlated with the proliferate state of the cell. PCNA is required for replication of DNA in vitro and has been identified as the auxiliary protein (cofactor) for DNA polymerase delta. The anti-PCNA antibodies react with the nuclei of proliferating cells. PCNA is essential for cellular DNA synthesis and is also required for the in vitro replication of simian virus 40 (SV40) DNA where it acts to coordinate leading and lagging strand synthesis at the replication fork. The PCNA protein may fulfil several separate roles in the cell nucleus associated with changes in its antigenic structure.

靶点与功能

PD-1（CD279）是CD28超家族I型跨膜蛋白，主要表达于活化的T细胞、B细胞、NK细胞及髓系细胞表面，通过与配体PD-L1（CD274）/PD-L2（CD273）结合传递免疫抑制信号：

免疫 checkpoint 机制：抑制TCR下游ZAP70磷酸化，减少IL-2、IFN-γ分泌，诱导效应T细胞“耗竭”（Exhaustion），维持外周免疫耐受；

临床价值：抗体阻断PD-1/PD-L1结合可“解除免疫刹车”，在黑色素瘤（ORR 43%）、非小细胞肺癌（ORR 39%）、霍奇金淋巴瘤（ORR 87%） 中显著延长生存期；

研究应用：用于鉴定T细胞耗竭表型（PD-1⁺Tim-3⁺）、构建肿瘤免疫模型（如MC38荷瘤小鼠联用抗PD-1抗体）及自身免疫病机制研究（如PD-1敲除小鼠自发狼疮样综合征）。

实验操作关键要点

流式细胞术检测T细胞PD-1表达：

样本制备：人外周血单个核细胞（PBMC）经CD3/CD28抗体刺激72小时，PBS洗涤后用2% FBS重悬（避免Fc受体非特异性结合）；

染色方案：抗体稀释至1μg/mL，4℃避光孵育30分钟，同型对照选用小鼠IgG1-PE（eBioscience 12-4714）；

结果分析：CD4⁺T细胞中PD-1⁺比例正常范围5%-15%，肿瘤患者外周血可升高至25%-40%（与T细胞耗竭正相关）。

IHC-P肿瘤组织染色：

抗原修复：柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）微波修复20分钟（石蜡切片），PD-1⁺TILs（肿瘤浸润淋巴细胞）信号显著增强；

阳性定位：肿瘤间质内淋巴细胞膜/胞质棕黄色颗粒，需结合CD3抗体共染确认T细胞来源；

对照设置：PD-1敲除小鼠脾脏（阴性对照）和鼻咽癌组织（阳性对照，TILs高表达）。

WB验证（活化T细胞裂解液）：

样本处理：Jurkat细胞用PMA（50ng/mL）+离子霉素（1μg/mL）刺激24小时，RIPA裂解液（含1mM PMSF）冰上裂解30分钟；

电泳条件：10% SDS-PAGE凝胶，恒压80V浓缩胶、120V分离胶，转膜0.45μm PVDF膜（250mA恒流1.5小时）；

抗体孵育：一抗1:1000稀释（5% BSA+TBST），4℃孵育过夜，曝光时间45秒（55kDa主条带需与非特异性条带区分）。

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