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细胞详述

肝卵原细胞是肝脏中一种具有强大增值能力和分化潜能的干细胞，在肝脏发生损伤和缺失后，肝脏之所以有强大的再生和修复能力是肝脏中干细胞发挥作用。在肝脏受到严重急性损伤时，肝卵圆细胞被活化，可以分化为肝实质细胞和肝内胆管上皮等多种功能性细胞，修复肝脏的损伤。

肝卵圆有肝内和肝外两个来源。此外肝卵圆细胞与原发性肝癌的发生也有着密切的关系，对肝卵圆细胞的研究在多个方面都有着重要的意义。

细胞特性

1) 组织来源于处理后大鼠的肝组织。

2) 细胞鉴定：c-kit或AFP免疫荧光染色为阳性。

3) 经鉴定细胞纯度高于90%。

4) 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

5) 细胞生长方式：多角形细胞，贴壁培养。

推荐培养基：

我们推荐使用 Delf 原代肝卵圆 细胞 培养体系 作为体外培养的培养基。
核心操作流程

复苏 冻存管37℃水浴迅速解冻，加入培养基离心（1000 RPM，4分钟），弃上清后重悬接种。

培养 贴壁细胞需用PBS润洗，0.25%胰酶消化1-2分钟，终止后按1:2传代；悬浮细胞直接离心分瓶，推荐使用专用培养基（如LONZA X-VIVO15系列）。

冻存 取对数期细胞，用含10%DMSO的冻存液（血清:培养基=1:9）重悬，密度≥1×10⁶/ml，程序降温后转入液氮。

细胞处理指南

接收与初步检查：

75%酒精消毒培养瓶外壁，观察培养基颜色及细胞密度。

显微镜下拍照记录（100X、200X）。

贴壁细胞传代：

吸弃旧培养基，PBS轻柔洗涤。

0.05%胰酶-EDTA消化至细胞变圆，加入终止液终止反应。

离心（1000rpm, 5min）后重悬，接种至新培养瓶（37℃, 5% CO₂）。

悬浮细胞处理：

直接离心收集细胞，更换新鲜培养基后继续培养。

注意事项

质量控制：细胞传代比例建议1:2至1:3，避免过度消化。

污染预防：严格无菌操作，定期检测支原体。

代次限制：原代细胞建议使用前5代，以保持功能稳定性。

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