细胞简介

大鼠主动脉外膜成纤维细胞分离自主动脉血管外膜组织；血管外膜是由疏松结缔组织组成，其中含螺旋状或纵向分布的弹性纤维和胶原纤维。血管壁的结缔组织细胞以成纤维细胞为主，当血管受损伤时，成纤维细胞具有修复外膜的能力。有的动脉中膜和外膜的交界处，有密集的弹性纤维组成的外弹性膜。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的血管外膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。血管外膜成纤维细胞是血管外膜的主要组成细胞之一，其主要生理功能合成和释放细胞外基质以及组织损伤后及时大量聚集修复损伤组织。

方法简介：实验室分离的大鼠主动脉外膜成纤维细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的大鼠主动脉外膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3-5代左右；3代以内状态**

消化液：0.25%胰蛋白酶大鼠主动脉外膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

培养基与环境

推荐培养基：含FBS（胎牛血清）、内皮细胞生长添加剂、青霉素/链霉素的专用内皮细胞培养基，如89% 1640培养基+10% FBS+1%双抗 。

培养条件：气相为空气95%、CO₂ 5%，温度37℃ 。

包被要求：培养瓶需经PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）包被 。

收货处理步骤

1. 消毒与观察 75%酒精喷洒培养瓶表面消毒，显微镜下观察细胞状态及有无污染，拍照记录 。

2. 平衡环境 放入37℃培养箱平衡2-3小时，使细胞适应温度和CO₂浓度 。

3. 培养基处理 若细胞密度＜80%，直接补加5-6ml培养基继续培养；若＞80%，可消化传代 。

4. 传代方法 1:2~1:4比例传代，2-3天换液一次，使用0.25%胰蛋白酶消化 。

传代与冻存

传代特性：原代细胞体外培养周期有限，通常可传2-3代（部分方法显示可传18代以上，需以具体产品说明为准） 。

冻存液：推荐含 DMSO 的血清冻存液（如90% FBS+10% DMSO），程序降温后保存于液氮。

注意事项

质量控制：细胞传代比例建议1:2至1:3，避免过度消化。

污染预防：严格无菌操作，定期检测支原体。

代次限制：原代细胞建议使用前5代，以保持功能稳定性。
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