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细胞简介：大鼠脊髓神经元细胞分离自脊髓组织；脊髓是细细的管束状的神经结构，位于脊柱的椎管内且被脊椎保护；是源自脑的中枢神经系统延伸部分。中枢神经系统的细胞依靠复杂的联系来处理传递信息。脊髓的主要功能是传送脑与外周之间的神经信息。人和脊椎动物中枢神经系统的一部分，在椎管里面，上端连接延髓，两旁发出成对的神经，分布到四肢、体壁和内脏。脊髓的内部有一个H形(蝴蝶型)灰质区，主要由神经细胞构成；在灰质区周围为白质区，主要由有髓神经纤维组成；脊髓是许多简单反射的中枢。脊髓两旁发出许多成对的神经(称为脊神经)分布到全身皮肤、肌肉和内脏器官。脊髓是周围神经与脑之间的通路，也是许多简单反射活动的低级中枢。按脊神经的出入可把脊髓也分为相应的31节，31对脊神经就是由不同的脊椎发出的。神经系统最基本的结构和功能单位是神经元，即神经细胞，其大小和外观在中枢神经系统中差异很大。但都具有胞体和树突、轴突。胞体又叫核周体，内含神经丝、微管、内质网、游离核糖体和一个有明显核仁的核。一些大神经元突起的粗面内质网可用Nissl染色显示，在光镜下是灰蓝色斑块状，称为尼氏小体。树突和轴突是神经元的突起，能在神经元之间传递电冲动，突起的大小和形态各不相同，很难用常规的显微镜鉴别。脊髓组织内含有大量胶质细胞，神经元含量少，分离纯化难度大，且脊髓神经元细胞是高度分化的终末细胞，不能分裂增殖，培养要求高。刚接种的脊髓神经元呈圆形，体积小，透亮，无突起。培养2-3d，可见胞体增大，突起增多延长；培养6-7d，细胞体大饱满，突起明显增加延长并交织成网，光晕明显，立体感强。培养20d后，死亡细胞明显增加，细胞出现内空泡，突起粗细不均，甚至脱壁，发生细胞崩解。

方法简介：实验室分离的大鼠脊髓神经元细胞采用胶原酶 - 胰酶联合消化法、神经元专用培养基培养筛选结合化学试剂抑制法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的大鼠脊髓神经元细胞经β-Tubulin-Ⅲ免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件PLL(0.1mg/ml)

培养基含B-27 Supplement、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：神经元细胞样

传代特性：属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液：0.125%胰蛋白酶大鼠脊髓神经元细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。
培养关键参数

培养基 含FBS、生长添加剂、青霉素/链霉素的专用内皮细胞培养基

培养条件 气相：空气95% + CO₂ 5%，温度37℃

换液频率 每2-3天换液一次

传代特性 可传2-3代（不同来源显示2-3代或18代以上，可能因培养方法差异）149

消化液 0.25%胰蛋白酶

包被条件 PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）

细胞的制备流程

组织取材：从活体动物或新鲜手术标本中获取目标组织，取材过程需严格无菌操作，尽量缩短组织暴露时间

组织处理：通过机械剪切、酶消化（常用胰蛋白酶、胶原酶）等方式将组织分散成单细胞悬液

细胞分离：利用过滤、离心等方法去除细胞碎片和杂质，获得纯化的单细胞群体

接种培养：将细胞接种到含特定培养基的培养容器中，置于37℃、5%CO₂的培养箱中培养

关键操作要点

细胞复苏

快速解冻：37℃水浴中摇晃冻存管至完全融化

离心洗涤：1000 RPM离心4分钟，弃上清后用培养基重悬

培养维护

贴壁细胞：汇合度达80%-90%时传代，使用胰酶消化（如0.25% Trypsin-EDTA）

悬浮细胞：定期换液，避免密度过高导致营养耗尽

冻存保护

冻存液配方：推荐10% DMSO + 90% 完全培养基，现用现配

程序降温：-80℃冰箱过夜后转入液氮长期保存

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