细胞简介

人骨骼肌细胞分离自四肢肌肉组织；骨骼肌又称横纹肌，肌肉中的一种，约占全身重量的40%。骨骼肌纤维为长柱形的多核细胞，肌膜的外面有基膜紧密贴附。属于横纹肌，横纹肌还包括心肌与内脏横纹肌，其中骨骼肌主要分布于四肢。每块肌肉都是具有一定形态、结构和功能的器官，有丰富的血管、淋巴分布，在躯体神经支配下收缩或舒张，进行随意运动。肌肉可根据共形状、大小、位置、起止点、纤维方向和作用等命名。依形态命名的如斜方肌、菱形肌、三角肌、梨状肌等。骨骼肌细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方。肌细胞内有许多沿细胞长轴平行排列的细丝状肌原纤维。每一肌原纤维都有相间排列的明带(Ⅰ带)及暗带(A带)。明带染色较浅，而暗带染色较深。暗带中间有一条较明亮的线称H线。H线的中部有一M线。明带中间，有一条较暗的线称为Z线。两个Z线之间的区段，叫做一个肌节。骨骼肌细胞也称横纹肌细胞，细胞呈纤维状，不分支，有明显横纹，核很多，且都位于细胞膜下方，细胞多呈梭行，具有一定的方向性。骨骼肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态：大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。

方法简介：实验室分离的人骨骼肌细胞采用胶原酶消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的人骨骼肌细胞经α-Sarcomeric actin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件PLL(0.1mg/ml)

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传3代左右

消化液：0.25%胰蛋白酶人骨骼肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

核心操作流程

复苏 冻存管37℃水浴迅速解冻，加入培养基离心（1000 RPM，4分钟），弃上清后重悬接种。

培养 贴壁细胞需用PBS润洗，0.25%胰酶消化1-2分钟，终止后按1:2传代；悬浮细胞直接离心分瓶，推荐使用专用培养基（如LONZA X-VIVO15系列）。

冻存 取对数期细胞，用含10%DMSO的冻存液（血清:培养基=1:9）重悬，密度≥1×10⁶/ml，程序降温后转入液氮。

细胞处理指南

接收与初步检查：

75%酒精消毒培养瓶外壁，观察培养基颜色及细胞密度。

显微镜下拍照记录（100X、200X）。

贴壁细胞传代：

吸弃旧培养基，PBS轻柔洗涤。

0.05%胰酶-EDTA消化至细胞变圆，加入终止液终止反应。

离心（1000rpm, 5min）后重悬，接种至新培养瓶（37℃, 5% CO₂）。

悬浮细胞处理：

直接离心收集细胞，更换新鲜培养基后继续培养。

注意事项

质量控制：细胞传代比例建议1:2至1:3，避免过度消化。

污染预防：严格无菌操作，定期检测支原体。

代次限制：原代细胞建议使用前5代，以保持功能稳定性。
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