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细胞简介：大鼠淋巴管内皮细胞分离自淋巴管组织；淋巴管由毛细淋巴管汇合而成。其形态结构与静脉相似，但管径较细，管壁较薄，瓣膜较多且发达，外形呈串珠状。淋巴管根据其位置分为浅、深二种。它们管位于皮下，常与浅静脉伴行，收集皮肤和皮下组织的淋巴。深淋巴管与深部血管伴行，收集肌肉和内脏的淋巴。浅、深淋巴管之间有广泛的交通支。淋巴管在向心行程中，通常经过一个或多个淋巴结，从而把淋巴细胞带入淋巴液。主要功能是滤过淋巴液，产生淋巴细胞和浆细胞，参与机体的免疫反应。当局部感染时，细菌、病毒或癌细胞等可沿淋巴管侵入，引起局部淋巴结肿大。如该淋巴结不能阻止和消灭它们，则病变可沿淋巴管的流注方向扩散和转移。淋巴管内皮细胞(LEC)是衬覆于淋巴管内表面的一种单层扁平上皮，是构成淋巴管壁的主要结构，参与维持体液平衡，调节淋巴细胞再循环和机体的免疫反应和组织液及蛋白质的运输，在疾病过程中也起着重要作用。近年研究表明，LEC还在伤口愈合、淋巴管水肿和炎症扩散等病理过程中起重要作用，而且与肿瘤转移密切相关。淋巴管内皮细胞主要功能：①调节体液、蛋白和组织压力平衡；②为免疫系统的重要组成部分。淋巴管内皮细胞与主要病生理变化：①囊肿型淋巴管瘤；②淋巴管炎；③淋巴结核。

方法简介：实验室分离的大鼠淋巴管内皮细胞采用中性蛋白酶消化法结合内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的大鼠淋巴管内皮细胞经VEGFR3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件PLL（0.1mg/ml）或明胶（0.1%）

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：内皮细胞样

传代特性：可传1-2代

消化液：0.25%胰蛋白酶大鼠淋巴管内皮细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。
材料与试剂准备

实验器材：无菌培养皿、移液管、离心管、CO₂培养箱、超净工作台、倒置显微镜、离心机等，所有器材需提前灭菌处理。

基础试剂：

细胞培养基：根据细胞类型选择专用培养基，如DMEM、RPMI-1640、MEM等，部分细胞需添加血清（胎牛血清FBS、新生牛血清NBS）或无血清替代物。

消化液：常用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液，用于组织解离；对于某些敏感细胞，可选用胶原酶、透明质酸酶等。

缓冲液：PBS（磷酸盐缓冲液）、Hanks平衡盐溶液（HBSS），用于冲洗组织和细胞。

其他：抗生素（青霉素、链霉素）、抗真菌剂（两性霉素B）、细胞冻存液（含10% DMSO和90%血清）。

原代细胞分离与培养流程

1. 组织样本处理

取材：从新鲜动物或人体组织中获取样本，操作需在无菌环境下进行，尽量缩短样本暴露时间。

清洗：用含抗生素的PBS反复冲洗组织，去除血液、脂肪等杂质。

剪碎：将组织剪成1-2mm³的小块，便于后续消化。

2. 细胞解离

酶消化法：将组织块加入消化液，37℃水浴孵育，期间轻轻摇晃，根据组织类型调整消化时间（通常15-60分钟）。

机械法：对一些难以酶解的组织，可采用研磨、过筛等方式分离细胞，但需注意避免过度机械损伤。

终止消化：加入含血清的培养基，中和消化酶活性，随后用滤网过滤细胞悬液，去除未消化的组织碎片。

3. 细胞接种与培养

离心收集：将过滤后的细胞悬液离心（1000-1500rpm，5-10分钟），弃上清，用培养基重悬细胞。

细胞计数：使用血细胞计数板或细胞计数仪测定细胞浓度，调整至合适的接种密度（通常1×10⁵-1×10⁶ cells/mL）。

培养条件：将细胞接种于培养瓶/皿中，置于37℃、5% CO₂、湿度95%的培养箱中培养，根据细胞类型定期更换培养基。

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