细胞简介

人毛囊干细胞分离自皮肤毛囊组织；毛囊是表皮细胞连续形成的袋样上皮。其基底是真皮凹进的真皮毛乳头，中心是一根毛发，立毛肌的一侧斜附在毛囊壁上，附着点的上方为皮脂腺通入毛囊的短颈，毛囊在皮肤表面的开口是毛囊孔。毛囊位于真皮和皮下组织中，毛囊向下伸入真皮约有一厘米深度，它是由包绕毛发与表皮相连的上皮鞘，以及皮脂腺和立毛肌所组成的一个结构比较复杂的器官附件组织。毛囊干细胞是在人的毛囊外根鞘隆突部中的一种细胞。毛囊干细胞属于成体干细胞，在体内处于静止状态，在体外培养作用下表现出惊人的增殖能力。研究发现，毛囊干细胞具有多向分化潜能，它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺，参与皮肤创伤愈合的过程。毛囊干细胞和其它成体干细胞一样，具有慢周期性、未分化性、自我更新和体外增殖能力强等特点。毛囊干细胞分化经毛囊干细胞(hair follicle stem cells，FSC)、短暂增殖细胞(transit amplifying cells，TAC)有丝分裂后分化细胞(postmitotic differentiating cells，PDC)三个阶段。毛囊干细胞在光镜下呈立方形，细胞体积小，核浆比率大，表面光滑，皱褶少，又被称为非锯齿形细胞，细胞体积的增大与增殖能力呈负相关。超微结构显示细胞表面有少许微绒毛，细胞核存在许多卷曲，染色质弥散分布，这些形态特征均表现出原始细胞的特性。

方法简介：实验室分离的人毛囊干细胞采用胶原酶 - 中性蛋白酶联合消化制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的人毛囊干细胞经CK19或CD200免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：梭形、多角形

传代特性：可传3-5代左右

消化液：0.25%胰蛋白酶人毛囊干细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

培养基与培养条件

专用培养基：含FBS、生长添加剂、青霉素、链霉素等（推荐使用配套专用培养基）

培养环境：气相为95%空气+5%CO₂，温度37℃

换液频率：每2-3天换液一次

细胞复苏步骤

将冻存管置于37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混匀

1000rpm离心3-4分钟，弃上清，加1-2mL培养基重悬细胞

将细胞悬液接种至培养瓶/皿中，加入适量培养基，培养过夜

次日换液并检查细胞密度

细胞传代（仅当细胞密度达80%-90%时进行）

弃上清，用无钙镁离子PBS润洗细胞1-2次

加入1mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，37℃培养箱消化1-2分钟

显微镜下观察细胞变圆脱落后，加少量培养基终止消化

1000rpm离心4分钟，弃上清，加1-2mL培养基重悬

按1:2比例接种至新培养容器中，加入新鲜培养基培养

细胞冻存

收集细胞，1000rpm离心4分钟，弃上清，PBS清洗一遍

加入无血清细胞冻存液，调整细胞密度至5×10⁶~1×10⁷/mL

每支冻存管分装1mL细胞悬液，做好标识

先置于-80℃冰箱24小时，再转入液氮罐长期储存
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