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细胞简介：大鼠胚胎成纤维细胞分离自胚胎；成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的胚胎成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。该细胞常用作ES细胞培养常用的饲养层细胞，能产生抑制ES细胞自主分化和促进ES细胞增殖的因子，故能有效地促进ES细胞的增殖并维持其未分化特性和多潜能性，且分泌效果优于外源添加的一些因子，而且可以为ES细胞的培养提供类似于体内的微环境，故在研究哺乳动物ES细胞中得到广泛使用。

方法简介：实验室分离的大鼠胚胎成纤维细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的大鼠胚胎成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传5代左右；3代以内状态**

消化液：0.25%胰蛋白酶大鼠胚胎成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。
分离与培养流程

组织处理：无菌获取组织后，用PBS清洗并剪碎至1mm³大小；

酶消化：胶原酶/胰酶混合消化（37℃, 10-20分钟），离心收集细胞悬液；

纯化：密度梯度离心或差速贴壁法去除杂细胞（如红细胞、成纤维细胞）；

接种培养：使用组织特异性培养基（如肝细胞专用培养基含生长因子），在37℃、5% CO₂条件下培养。

质量控制标准

纯度验证：免疫荧光检测细胞特异性标志物（如肝细胞需验证CYP450活性）；

无菌检测：排除HIV-1、HBV、HCV、支原体等污染；

活力要求：复苏后存活率≥80%，贴壁率≥70%；

批次一致性：提供细胞计数、活力检测及功能验证报告（如代谢酶活性）。

运输与保存

运输形式：

冻存管（干冰运输，含冻存液：90%血清+10% DMSO）；

培养瓶（常温运输，培养基充满至瓶口）。

保存条件：

液氮（长期，≤-150℃）；

-80℃（短期，≤1个月）。

注：收到细胞需立即检查包装完整性并记录状态。

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