细胞简介

人牙周膜成纤维细胞分离自牙周膜组织；牙周膜(牙周韧带、牙周间隙)是由致密结缔组织所构成。多数纤维排列成束，纤维的一端埋于牙骨质内，另一端则埋于牙槽窝骨壁里，使牙齿固位于牙槽窝内；牙周膜内有神经、血管、淋巴和上皮细胞等。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的牙周膜成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。牙周膜成纤维细胞(PLFs)作为牙周膜的主体细胞，是牙周膜主要的间质细胞，它不仅具有合成胶原、基质、弹力纤维和糖蛋白的功能，还有吸收胶原吞噬异物的能力，还参与了牙周组织的病变、修复及再生过程。现在，利用牙周膜细胞建立体外模型，已经成为有关员研究牙周组织疾病的重要手段。

方法简介：实验室分离的人牙周膜成纤维细胞采用胶原酶 - 胰蛋白酶联合消化法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的人牙周膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传5代左右；3代以内状态**

消化液：0.25%胰蛋白酶人牙周膜成纤维细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

培养条件

换液频率：每2-3天更换一次培养基。

传代比例：1:2至1:3（建议细胞融合度达80%-90%时传代）。

消化液：0.25%胰蛋白酶（含EDTA）。

传代周期：可传3-8代。

细胞分离与制备

分离方法：

中性蛋白酶-胶原酶联合消化法或胰蛋白酶-胶原酶混合消化法（EnkiLife）。

质量控制：

原代细胞来源于新鲜组织，采集过程符合伦理规范，并通过α-SMA免疫荧光验证表型。

培养与传代操作

传代步骤：

吸弃旧培养液，用PBS轻柔冲洗。

加入适量胰蛋白酶消化，显微镜下观察细胞回缩后终止消化。

离心重悬，按比例接种至新培养瓶。

注意事项：

培养基冻融后可能出现少量絮状物，不影响使用。

操作时避免污染，接触培养液后需立即冲洗。
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