细胞简介

人直肠平滑肌细胞分离自直肠组织；直肠为大肠的未段，位于小骨盆内。上端平第3骶椎处接续乙状结肠，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿过盆膈，下端以肛门而终。直肠上端的大小似结肠，其下端扩大成直肠壶腹，是粪便排出前的暂存部位，最下端变细接肛管。直肠在盆腔内的位置与骶椎腹面关系密切，与骶椎有相同的曲度。直肠周围多脂肪、无纵带，位于膀胱和生殖器官的背侧。直肠平滑肌细胞原代分离培养3天后，可见细胞贴壁伸展，细胞形态：大小不一，呈梭形、不规则形、三角形或扇形，核卵圆形、居中；2周后细胞汇合，多数细胞伸展呈长梭形，胞浆丰富，有分枝状突起，细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长，高低起伏；细胞密度低时，常交织成网状；密度高时，则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快，4-6天即可汇合，并保持上述形态学特征和生长特点。直肠的动脉血供主要是来自肠系膜下动脉的直肠上动脉，来自髂内动脉的直肠中动脉和来自髂内动脉的直肠下动脉。平滑肌收缩是胃肠蠕动中基本的运动方式；肠炎时由于平滑肌特殊肌动蛋白的增加导致了平滑肌层的增厚。平滑肌肌动蛋白可能影响收缩力的产生，这进一步证明了炎症时的肠平滑肌细胞具有可塑性。利用肠平滑肌细胞的培养，可以帮助了解收缩、增殖和胃肠道结缔组织对平滑肌细胞的反应。

方法简介：实验室分离的人直肠平滑肌细胞采用胰蛋白酶 - 胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10⁵cells/瓶。

质量检测：实验室分离的人直肠平滑肌细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：包被条件

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率:每2-3天换液一次

生长特性：贴壁

细胞形态：成纤维细胞样

传代特性：可传5代左右；3代以内状态**

消化液：0.25%胰蛋白酶人直肠平滑肌细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的**培养状态。

培养基与培养条件

专用培养基：含FBS、生长添加剂、青霉素、链霉素等（推荐使用配套专用培养基）

培养环境：气相为95%空气+5%CO₂，温度37℃

换液频率：每2-3天换液一次

细胞复苏步骤

将冻存管置于37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混匀

1000rpm离心3-4分钟，弃上清，加1-2mL培养基重悬细胞

将细胞悬液接种至培养瓶/皿中，加入适量培养基，培养过夜

次日换液并检查细胞密度

细胞传代（仅当细胞密度达80%-90%时进行）

弃上清，用无钙镁离子PBS润洗细胞1-2次

加入1mL 0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，37℃培养箱消化1-2分钟

显微镜下观察细胞变圆脱落后，加少量培养基终止消化

1000rpm离心4分钟，弃上清，加1-2mL培养基重悬

按1:2比例接种至新培养容器中，加入新鲜培养基培养

细胞冻存

收集细胞，1000rpm离心4分钟，弃上清，PBS清洗一遍

加入无血清细胞冻存液，调整细胞密度至5×10⁶~1×10⁷/mL

每支冻存管分装1mL细胞悬液，做好标识

先置于-80℃冰箱24小时，再转入液氮罐长期储存
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