细胞简介

人膀胱上皮细胞分离自膀胱组织；膀胱是一个储尿器官，在哺乳类动物，它是由平滑肌组成的一个囊形结构，位于骨盆内，其后端开口与尿道相通。膀胱与尿道的交界处有括约肌，可以控制尿液的排出。膀胱壁由三层组织组成，由内向外为黏膜层、肌层和外膜。肌层由平滑肌纤维构成，称为逼尿肌，逼尿肌收缩，可使膀胱内压升高，压迫尿液由尿道排出。在膀胱与尿道交界处有较厚的环形肌，形成尿道内括约肌。在括约肌收缩能关闭尿道内口，防止尿液自膀胱漏出。膀胱壁分为三层：即浆膜层（蜂窝脂肪组织）、肌肉层（逼尿肌、膀胱三角区肌）和黏膜层（极薄的一层移行上皮组织）。其主要作用有：①组成过滤屏障内壁的重要部分；②在炎症和致血栓物质的刺激合成必要的生物活性分子；③受损后影响系膜细胞和上皮细胞，进而影响肾脏病变。

方法简介：

公司实验室分离的人膀胱移行上皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法，并通过上皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人膀胱移行上皮细胞经Cytokeratin-AE1/AE3免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 上皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

培养技术规范

基础培养基选择需根据细胞类型选用专用配方，如肝细胞培养基含10%胎牛血清和生长因子。培养条件统一设置为37℃、5% CO₂环境，湿度维持在70%-80%。传代操作需在80-90%融合度时进行，使用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化1-3分钟，以1:2至1:5比例分瓶。冻存标准采用90%血清+10%DMSO冻存液，程序降温后液氮保存。

质量控制体系

所有原代细胞需通过三项核心检测：

病原体检测：排除HIV-1、HBV、HCV及支原体污染

纯度验证：通过细胞特异性标志物免疫染色（如肝细胞检测白蛋白表达）

活性评估：复苏后活细胞率≥80%，贴壁率≥70% 每批次细胞需提供包含上述数据的质量分析报告。

原代细胞培养注意事项

无菌操作：全程在超净工作台内进行，实验人员需穿戴无菌手套、口罩、实验服，避免细菌、真菌污染。

培养基选择：不同类型的原代细胞对培养基成分要求差异较大，需严格按照细胞说明书选择专用培养基，避免随意更换。

消化时间控制：酶消化时间过长会导致细胞损伤甚至死亡，过短则细胞分离不充分，需通过显微镜观察细胞形态变化，及时终止消化。

传代时机：当细胞融合度达到80%-90%时进行传代，避免细胞过度融合导致接触抑制，影响细胞活性。

冻存与复苏：原代细胞冻存时需缓慢降温（如采用程序降温盒），复苏时快速解冻（37℃水浴1-2分钟），并及时离心去除冻存液中的DMSO，减少细胞毒性。

运输与接收处理

提供两种运输方案：

冻存运输：干冰保温（-80℃可保存1个月），接收后需立即复苏或转入液氮

活细胞运输：T25培养瓶常温运输，接收后静置2-4小时观察贴壁情况 异常需在收到后72小时内反馈，并提供细胞状态照片（100X和200X各一张）。
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