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细胞简介：

人肺大静脉内皮细胞分离自肺大静脉组织；肺大静脉在用肺呼吸的脊椎动物中，把动脉血由肺送回心脏的静脉，是**一个静脉里流动脉血的血管。左右1对，共4条，两条连接右肺，两条连接左肺。肺静脉异位引流是指肺静脉未能直接与左心房连接，而与右心房或体静脉系统连接的先天性心血管异位。肺静脉淤血性肺动脉高压，是由于肺静脉内血液淤滞而引起的肺动脉高压。正常情况下，肺循环具有血压低、阻力小和顺应性大的特点，肺动脉压力高低取决于单位时间内肺动脉血流量和肺血管的阻力，要维持肺循环的低压、低阻的状态，必须保证整个肺循环系统的畅通无阻，血液顺利地由肺动脉经毛细血管进入肺静脉，再入左心室，经过左心室收缩进入体循环，才能避免肺动脉内压力升高。细胞呈多边形鹅卵石状排列；该细胞在维持血管内外的动态平衡、合成和分泌细胞因子和介质、维持凝血和纤溶的动态平衡中起重要作用。

方法简介：

公司实验室分离的人肺大静脉内皮细胞采用胰蛋白酶-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法、并通过内皮细胞专用培养基培养筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人肺大静脉内皮细胞经CD31免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%）

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 内皮细胞样

传代特性 可传2-3代

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%
核心操作流程

复苏 冻存管37℃水浴迅速解冻，加入培养基离心（1000 RPM，4分钟），弃上清后重悬接种。

培养 贴壁细胞需用PBS润洗，0.25%胰酶消化1-2分钟，终止后按1:2传代；悬浮细胞直接离心分瓶，推荐使用专用培养基。

冻存 取对数期细胞，用含10%DMSO的冻存液（血清:培养基=1:9）重悬，密度≥1×10⁶/ml，程序降温后转入液氮。

细胞处理指南

接收与初步检查：

75%酒精消毒培养瓶外壁，观察培养基颜色及细胞密度。

显微镜下拍照记录（100X、200X）。

贴壁细胞传代：

吸弃旧培养基，PBS轻柔洗涤。

0.05%胰酶-EDTA消化至细胞变圆，加入终止液终止反应。

离心（1000rpm, 5min）后重悬，接种至新培养瓶（37℃, 5% CO₂）。

悬浮细胞处理：

直接离心收集细胞，更换新鲜培养基后继续培养。

注意事项

质量控制：细胞传代比例建议1:2至1:3，避免过度消化。

污染预防：严格无菌操作，定期检测支原体。

代次限制：原代细胞建议使用前5代，以保持功能稳定性。

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