细胞简介

人小脑颗粒细胞分离自小脑皮层组织；神经元是神经系统最基本的结构与功能单位，小脑颗粒神经元是体积较小的神经元，直径约10μm，在中枢神经系统中含量非常丰富，近乎神经元数量的一半。由于小脑神经元的生长、分化和大脑皮层神经元相似，而且数量多、便于取材，因此小脑颗粒神经元是研究神经元生长发育、神经轴突再生及神经疾病发生机制和临床神经药理的重要手段。小脑颗粒神经元是小脑主要的中间神经元，在哺乳动物的小脑内数量最为丰富。颗粒神经元的轴突与苔状纤维和爬行纤维相联系，形成小脑皮层内的神经元环路，在小脑的神经活动中起着非常重要的作用。在动物传染性海绵状脑病中，病变可波及小脑颗粒神经元，导致小脑皮层的神经元环路受损，从而呈现神经性行为失调。研究小脑颗粒神经元在动物传染性海绵状脑病病理学变化中的反应、病理发生的机理特别是分子机理，有赖于小脑颗粒神经元细胞模型的建立。小脑颗粒细胞的轴突是沿冠状轴分布的平行纤维，正是这种排列保证了兴奋的单向传导，这是小脑功能理论中的关键假设，小脑颗粒细胞通过g-氨基丁酸接受戈尔吉细胞的抑制性突触的信息传入。

方法简介：

公司实验室分离的人小脑颗粒细胞采用胰蛋白酶消化法结合神经元专用培养基、化学试剂抑制法筛选制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

质量检测：

公司实验室分离的人小脑颗粒细胞经β-Tubulin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养信息：

包被条件 PLL（0.1mg/ml）

培养基 含B-27、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 神经元细胞样

传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液 0.25%胰蛋白酶

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

培养技术规范

基础培养基选择需根据细胞类型选用专用配方，如肝细胞培养基含10%胎牛血清和生长因子。培养条件统一设置为37℃、5% CO₂环境，湿度维持在70%-80%。传代操作需在80-90%融合度时进行，使用0.25%胰蛋白酶-EDTA消化1-3分钟，以1:2至1:5比例分瓶。冻存标准采用90%血清+10%DMSO冻存液，程序降温后液氮保存。

质量控制体系

所有原代细胞需通过三项核心检测：

病原体检测：排除HIV-1、HBV、HCV及支原体污染

纯度验证：通过细胞特异性标志物免疫染色（如肝细胞检测白蛋白表达）

活性评估：复苏后活细胞率≥80%，贴壁率≥70% 每批次细胞需提供包含上述数据的质量分析报告。

原代细胞培养注意事项

无菌操作：全程在超净工作台内进行，实验人员需穿戴无菌手套、口罩、实验服，避免细菌、真菌污染。

培养基选择：不同类型的原代细胞对培养基成分要求差异较大，需严格按照细胞说明书选择专用培养基，避免随意更换。

消化时间控制：酶消化时间过长会导致细胞损伤甚至死亡，过短则细胞分离不充分，需通过显微镜观察细胞形态变化，及时终止消化。

传代时机：当细胞融合度达到80%-90%时进行传代，避免细胞过度融合导致接触抑制，影响细胞活性。

冻存与复苏：原代细胞冻存时需缓慢降温（如采用程序降温盒），复苏时快速解冻（37℃水浴1-2分钟），并及时离心去除冻存液中的DMSO，减少细胞毒性。

运输与接收处理

提供两种运输方案：

冻存运输：干冰保温（-80℃可保存1个月），接收后需立即复苏或转入液氮

活细胞运输：T25培养瓶常温运输，接收后静置2-4小时观察贴壁情况 异常需在收到后72小时内反馈，并提供细胞状态照片（100X和200X各一张）。
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