检测原理

采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。

包被：微孔板预包被小鼠IL-13捕获抗体。

反应：依次加入样本、标准品及HRP标记检测抗体，经温育洗涤后，加入底物TMB显色。

显色：TMB在过氧化物酶催化下转为蓝色，酸性终止液作用下最终呈黄色，颜色深度与样本中IL-13浓度正相关。

读数：酶标仪在450 nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算浓度。

样本要求与处理

适用样本类型：

血清、血浆、组织匀浆、细胞上清液、尿液等。

样本处理方法：

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟取上清，-20℃或-80℃保存。

血浆：EDTA/柠檬酸盐/肝素抗凝，3000×g离心30分钟取上清。

组织匀浆：生理盐水匀浆后，3000×g离心10分钟取上清。

细胞上清：3000×g离心10分钟去除颗粒物。

注意事项：

避免溶血或反复冻融；

高浓度样本需用稀释液预稀释后检测。

操作步骤

试剂平衡：冷藏试剂室温平衡15-30分钟。

加样：每孔依次加入标准品、样本（建议复孔检测），37℃温育30-60分钟。

洗涤：弃液后加入洗涤液，重复3-5次。

显色：加入TMB底物，避光反应15分钟，终止液终止反应。

检测：450 nm波长读取OD值，绘制标准曲线计算浓度。

注意事项

质量控制：

每次实验需同步制作标准曲线；

建议复孔检测以减小误差。

干扰因素：

避免试剂交叉污染；

浓洗涤液若有结晶，可37℃水浴溶解后使用。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

技术参数

检测范围：依不同，通常为15.6-1000 pg/mL（具体参考标准曲线）。

灵敏度：<5 pg/mL（可能存在差异）。

精密度：板内、板间变异系数均<10%。

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