大鼠β2微球蛋白(BMG/β2-MG)ELISA试剂盒

预期用途

本酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒用于定量检测大鼠血清、血浆(肝素/EDTA抗凝)、细胞培养上清液或其他生物体液中的β2微球蛋白(BMG/β2-MG)浓度。

β2-MG是主要组织相容性复合体I类(MHC-I)分子的轻链，广泛存在于有核细胞表面。血清中的β2-MG水平是评估肾小球滤过功能的敏感指标，在肾小管损伤、免疫激活状态(如炎症、自身免疫病、淋巴增殖性疾病)以及某些肿瘤中也可能升高。

本试剂盒仅供体外研究使用(For Research Use Only, RUO)，不可用于临床诊断或治疗决策。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA(Sandwich ELISA) 原理。

预包被： 在微孔板条孔内预包被抗大鼠β2-MG抗体(捕获抗体)。

**步反应： 加入待测样品或标准品，其中的大鼠β2-MG会被预包被的捕获抗体特异结合。

**步反应： 加入生物素标记的抗大鼠β2-MG抗体(检测抗体)。该抗体与已经结合的β2-MG形成“夹心”复合物。

第三步反应： 加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素。链霉亲和素与生物素特异性结合。

显色与终止： 加入显色底物(TMB)，在HRP的催化下产生蓝色产物。加入终止液后，颜色由蓝变黄。

定量： 在特定波长(通常450nm，参考波长630nm或570nm)下，测定各孔的吸光度(OD值)。OD值与样品中的β2-MG浓度呈正相关。通过绘制标准曲线(浓度 vs OD值)，即可计算出待测样品中β2-MG的浓度。

样品收集与处理

血清： 无菌采血，室温自然凝固10-20分钟，1000-2000×g离心20分钟，立即分装上清(血清)，避免溶血。-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。

血浆： 推荐使用肝素或EDTA抗凝管。采集后30分钟内1000-2000×g离心15分钟，立即分装血浆。-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。避免使用含NaN3的抗凝剂(会抑制HRP活性)。

细胞培养上清： 300×g离心10分钟去除细胞碎片，立即分装。-20°C或-80°C保存，避免反复冻融。

其他体液： 尿液、脑脊液等需按照特定方法处理并稀释。样品中的β2-MG含量过高时(通常OD值超出标准曲线最高点)，需用样品稀释液进行适当倍数稀释后重测。

操作步骤

准备： 将试剂盒从冰箱取出，所有试剂在实验开始前平衡至室温(18-25°C)约30分钟。配制所需体积的洗涤液(Wash Buffer, 1x)。取出所需板条。

设置： 在微孔板上设置标准品孔和待测样品孔(建议设双复孔或三复孔)。空白孔(只加样品稀释液和底物/终止液)用于调零。

加样： 空白孔：加100μL样品稀释液。标准品孔：加入100μL各浓度标准品。样品孔：加入100μL经过适当稀释或不稀释的待测样品。

孵育1： 立即用封板膜封住板孔，置37°C恒温孵育箱/水浴锅中孵育X分钟 (如90分钟)。

洗板1： 小心揭掉封板膜，甩去孔内液体。每孔加满洗涤液(300μL左右)，静置30秒后甩掉。重复此过程3次 (共洗4遍)。最后一次洗板后，在吸水纸上用力拍干孔内残余液体(但勿使孔干燥)。

加检测抗体： 除空白孔外，每孔加入100μL生物素标记的检测抗体。覆盖新的封板膜。

孵育2： 置37°C恒温孵育Y分钟 (如60分钟)。

洗板2： 重复步骤5的洗板过程。

加SA-HRP： 每孔加入100μL链霉亲和素-HRP溶液。**空白孔也加。**覆盖新的封板膜。

孵育3： 置37°C恒温孵育Z分钟 (如30分钟)。全程避光。

洗板3： 重复步骤5的洗板过程。更彻底地拍干孔内液体 (非常重要)。

显色： 每孔 (包括空白孔) 立即加入100μL TMB显色底物。覆盖封板膜，置37°C避光孵育T分钟 (如10-30分钟)。密切观察颜色变化(蓝色)。

终止： 每孔加入50μL终止液(Stop Solution)。加入终止液后，蓝色立即变为黄色。轻轻摇晃微孔板使混合均匀。

读数： 在终止反应后5-30分钟内，使用酶标仪在450nm波长下读取各孔OD值。如有要求，设定参考波长(如630nm或570nm)，进行双波长校正。
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