大鼠β-防御素(β-DF)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒用于定量检测大鼠血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆液及其他生物液体样本中β-防御素(Rat β-DF)的含量。适用于科学研究用途，不用于临床诊断。

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。将抗大鼠β-DF单克隆抗体包被于微孔板上。加入标准品或样本，其中的β-DF会与包被抗体结合。洗板后，加入生物素标记的抗大鼠β-DF检测抗体，形成“包被抗体-β-DF-生物素化检测抗体”复合物。再次洗板后，加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的链霉亲和素(Streptavidin)。链霉亲和素与生物素特异性结合。洗去未结合的酶结合物后，加入显色底物TMB。在HRP催化下，TMB产生蓝色产物，加入终止液后变为黄色。颜色的深浅与样本中β-DF的浓度呈正比。于450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线即可计算出样本中β-DF的含量。

试剂盒组分

(96孔板规格)

| 组分 | 规格/数量 | 保存条件 |

| 1. 预包被微孔板 | 8孔×12条 | 2-8°C (干燥) |

| 包被有抗大鼠β-DF单克隆抗体 | | |

| 2. 标准品 (Recombinant Rat β-DF) | 冻干粉或液体, 通常包含： | |

|     Std 0: 0 pg/mL | 1瓶 | -20°C |

|     Std 1-7: 系列浓度 | 各1瓶 (或1瓶需稀释) | -20°C |

| *标准曲线范围：[例如：15.6 - 1000 pg/mL] * | | |

| 3. 样本稀释液 (Sample Diluent) | 1瓶 (20-30mL) | 2-8°C |

| 4. 生物素标记检测抗体 (Detection Ab) | 1瓶 (120μL) | -20°C |

| 5. 酶结合物 (HRP-Streptavidin) | 1瓶 (120μL) | -20°C |

| 6. 洗涤液 (Wash Buffer, 20X) | 1瓶 (20-30mL) | 2-8°C |

| 使用前需用去离子水按1:20稀释成1X工作液 | | |

| 7. 显色底物 (TMB Substrate) | 1瓶 (10-12mL) | 2-8°C (避光) |

| 8. 终止液 (Stop Solution) | 1瓶 (10-12mL) | 2-8°C |

| 9. 封板膜 (Plate Sealer) | 3-4张 | 室温 |

所需自备试剂和器材

酶标仪 (450nm主波长，建议630nm作为参比波长滤光片)

恒温箱 (37°C)

可调移液器及配套枪头

洗板机或手动多通道移液器+洗瓶

漩涡混合器

去离子水或纯水仪制水

吸水纸

样品收集管

加样槽

结果计算

计算平均OD值：分别计算标准品各浓度点(Std 0-7)和样本孔复孔的平均OD450值。

绘制标准曲线：

以标准品浓度的对数为横坐标(X轴)，对应的平均OD450值为纵坐标(Y轴)，在坐标纸上绘制或使用专业软件制作标准曲线。

通常采用四参数(4-PL)或对数(logit-log)函数拟合曲线效果**，以得到最精确的浓度值。简单的线性回归仅在对数线性区域内勉强可用。

计算样本浓度：

将样本的平均OD450值代入标准曲线的方程中，求解出X值(即浓度值)。

如果样本经过稀释，计算结果必须乘以样本的稀释倍数，才能得到样本中β-DF的实际浓度(单位: pg/mL 或 ng/mL)。
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