人白介素16(IL-16)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心法：

预包被抗人IL-16抗体捕获样本中的IL-16

加入HRP标记的检测抗体形成复合物

通过底物显色（450nm波长测定OD值），浓度与吸光度成正比

试剂盒组成

预包被微孔板（96孔，可拆卸）

IL-16标准品（6浓度梯度，冻干粉或液体）

样本稀释液（40×浓缩液）

HRP标记检测抗体（100×浓缩）

洗涤缓冲液（20×浓缩）

底物A/B（TMB溶液）

终止液（2M硫酸）

操作步骤

平衡：试剂盒室温平衡20分钟，标准品复溶。

加样：

标准品孔：50μL不同浓度标准品

样本孔：10μL样本 + 40μL稀释液（终稀释倍数5×）

空白孔：仅加稀释液

孵育：37℃避光孵育60分钟，洗板5次。

显色：每孔加底物A/B各50μL，37℃避光15分钟。

终止：加入50μL终止液，15分钟内450nm读值。

样本要求

类型：血清、血浆（肝素/EDTA抗凝）、细胞上清液

保存：-20℃短期（1周内），-80℃长期（避免反复冻融）

注意事项

实验前确保移液器校准，避免交叉污染。

洗涤时需充分拍干，避免残留液体影响结果。

显色时间需严格控制，超时可能导致假阳性。

若OD值超出标准曲线范围，需稀释样本后重测。

计算与结果

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制曲线。

通过四参数拟合计算样本浓度（单位：pg/mL）。

性能参数

灵敏度：<5 pg/mL（具体以批次为准）

检测范围：15.6–1000 pg/mL

精密度：板内CV<10%，板间CV<15%
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