大鼠结蛋白(Des)ELISA试剂盒

检测原理

双抗体夹心法（Sandwich ELISA）

试剂盒组分

| 组分名称 | 规格/数量 | 保存条件 |

| 预包被抗大鼠Des抗体酶标板 | 96孔（12条×8孔） | 2-8℃（干燥避光）|

| 大鼠Des标准品 | 6管（浓度梯度） | -20℃* |

| 生物素化检测抗体 | 1瓶（120 μL） | -20℃* |

| 辣根过氧化物酶(HRP)标记链霉亲和素 | 1瓶（120 μL）| -20℃* |

| 样本稀释液 | 1瓶（15 mL） | 2-8℃ |

| 检测抗体稀释液 | 1瓶（10 mL） | 2-8℃ |

| TMB显色底物溶液 | 1瓶（11 mL） | 2-8℃（避光） |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（11 mL） | 室温 |

| 洗涤缓冲液（30×浓缩液） | 1瓶（20 mL） | 2-8℃ |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

| 说明书 | 1份 | - |

* 复溶后标准品/抗体建议分装保存于-20℃，避免反复冻融

样品要求

适用样本类型：大鼠血清、血浆、组织匀浆液、细胞裂解液

样本处理：

血清/血浆： EDTA/肝素抗凝，离心去除颗粒物，避免溶血

组织匀浆： 加入PBS（含蛋白酶抑制剂）匀浆，离心取上清

细胞上清： 离心去除沉淀物

保存：新鲜样本建议2-8℃保存≤24小时；长期储存需≤-20℃（避免反复冻融）

检测范围 & 灵敏度

检测范围： 31.25–2000 pg/mL（标准曲线范围）

最低检测限(LoD)： ≤10 pg/mL

检测时长：约3.5–4小时

实验步骤

标准品/样本准备：标准品梯度稀释，样本按说明书稀释

加样孵育：加入100μL标准品/样本至酶标板，37℃孵育90分钟

加检测抗体：洗板后，加入100μL生物素化抗体，37℃孵育60分钟

加酶结合物：洗板后，加入100μL HRP-链霉亲和素，37℃孵育30分钟

显色：洗板后，加入90μL TMB底物，避光显色15–20分钟

终止：加入50μL终止液，颜色由蓝转黄

检测：酶标仪读取450nm处吸光值（参考波长：570nm/630nm）

结果计算

用标准品浓度（X轴）与对应OD值（Y轴）绘制标准曲线（推荐四参数逻辑回归拟合）

根据样本OD值在标准曲线上推算出Des浓度

最终浓度 = 曲线测定值 × 样本稀释倍数

性能参数

精密度：

板内变异系数(CV) < 10%

板间变异系数(CV) < 15%

特异性： 不与大鼠其他结构蛋白（如波形蛋白、角蛋白等）交叉反应

回收率： 85–115%（添加标准品回收实验）

注意事项

试剂复温：所有组分使用前需平衡至室温（25℃）

洗涤充分：每次洗涤后需在吸水纸上拍干，减少背景干扰

避免污染：更换吸头操作，避免酶标板边缘污染

TMB避光：显色步骤需严格避光

终止液腐蚀性：操作时穿戴防护装备
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