大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)ELISA试剂盒

产品概述

大鼠载脂蛋白A1(apo-A1)是高密度脂蛋白的主要成分，具有抗动脉粥样硬化作用，其水平降低与高脂血症、冠心病相关，是心血管疾病风险评估的重要指标。本试剂盒采用双抗体夹心法，可定量检测大鼠血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液等样本中的apo-A1含量。

技术参数

检测范围：常见范围为1.56μg/mL - 100μg/mL 或 62.5μg/mL - 2000μg/mL

最低检测限：0.39μg/mL - 1.0μg/mL

特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应

重复性：板内变异系数小于10%，板间变异系数小于15%

准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值≥0.9900

有效期：6个月

试剂盒组成

（以96孔规格为例）

组分 规格 说明

预包被微孔板 12孔×8条 包被有抗apo-A1捕获抗体

apo-A1标准品 1瓶（冻干品） 用于绘制标准曲线，原倍标准品需稀释使用

生物素标记检测抗体 1×120μL 特异性识别apo-A1的检测抗体，使用前需稀释

HRP标记亲和素 1×120μL 与生物素标记抗体结合，使用前需稀释

底物溶液(TMB) 1×10mL 显色底物，遇HRP酶显蓝色

终止液 1×10mL 终止反应，溶液颜色由蓝变黄（2N H₂SO₄）

洗涤缓冲液(10×浓缩液) 1×25mL 用于清洗微孔板，使用前用蒸馏水稀释10倍

样本稀释液 1×20mL 用于稀释样本和标准品

自备物品

酶标仪（450nm滤光片，建议提前预热）

高精度加样器及枪头（0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL）

37℃恒温箱

蒸馏水或去离子水

吸水纸

盛放洗液的容器

干净的试管和Eppendorf管

样本收集、处理及保存方法

样本类型

血清、血浆、组织匀浆、细胞培养上清液、尿液、胸腹水等

样本处理方法

血清：使用不含热原和内毒素的试管收集血液，室温放置2小时或4℃过夜后，1000g离心20分钟，取上清即可检测；或分装后-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。

血浆：以EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，采集后30分钟内2-8℃ 1000g离心15分钟，取上清检测；或分装后-20℃/-80℃保存，避免反复冻融。

细胞培养上清液：3000g离心10分钟去除颗粒和聚合物，取上清检测；或分装后-20℃/-80℃保存。

组织匀浆：按比例加入裂解液匀浆，3000g离心10分钟，取上清检测；或分装后-80℃保存。

其他生物样本：1000g离心20分钟，取上清检测；或分装后-20℃/-80℃保存。

注意事项

避免使用溶血或高脂样本，溶血会影响检测结果

新鲜样本优先使用，长期保存需-80℃低温冷冻

样本稀释原则：先通过文献检索了解待测样本大致含量，确定适当稀释倍数；若样本OD值大于标准品最高浓度孔的OD值，需用样本稀释液稀释后重新测定，计算结果时乘以总稀释倍数

实验操作步骤

实验准备

提前20-30分钟将试剂盒从冷藏环境取出，平衡至室温

浓缩洗涤液用蒸馏水按1:10比例稀释，备用

配制标准品：将标准品用样本稀释液进行梯度稀释，建议设置6-8个浓度梯度（如原倍标准品、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32稀释等），同时设置空白孔（仅加样本稀释液）

加样

取出所需数量的酶标板条，剩余板条立即放回自封袋密封，2-8℃保存

标准品孔：加入50μL不同浓度梯度的标准品溶液，每个浓度建议做复孔

样本孔：直接或稀释后加入50μL处理好的样本，可根据需求设置复孔

空白孔：加入50μL样本稀释液

温育反应

向各反应孔加入50μL稀释好的生物素标记检测抗体

轻轻振荡混匀，贴上封板膜，37℃温育1小时

洗涤

甩去孔内液体，每孔加满稀释后的洗涤缓冲液，浸泡1-2分钟，间歇摇动

甩去洗涤液，用吸水纸拍干，重复此操作3次；若使用洗板机洗涤，洗涤次数增加至4次

加酶标试剂

向各反应孔加入80μL稀释好的HRP标记亲和素

轻轻振荡混匀，贴上封板膜，37℃温育30分钟

再次洗涤

重复上述洗涤步骤，洗板4次

显色

向各反应孔加入底物溶液(TMB)50μL/孔

轻轻振荡混匀，37℃避光温育10-30分钟（观察颜色变化，待标准品梯度孔出现明显颜色梯度时终止反应）

终止反应

向各反应孔加入终止液50μL/孔，轻轻振荡混匀，此时溶液颜色由蓝变黄

检测

立即用酶标仪在450nm波长处测定各孔的OD值（以空白孔调零）

结果计算与判定

绘制标准曲线：以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线；或通过酶标仪软件自动计算标准曲线方程

样本浓度计算：根据样本孔的OD值，从标准曲线上查出对应的浓度；若样本经过稀释，需乘以相应的稀释倍数

结果判定：

定性检测：样本OD值≥阴性对照OD值的2.1倍，判定为阳性

定量检测：根据标准曲线计算出样本中apo-A1的具体浓度值

注意事项

试剂盒从冷藏环境取出后，需在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后未用完的板条应装入密封袋，2-8℃保存

浓洗涤液低温保存可能会有盐析出，稀释时可在37℃水浴中加温助溶，不影响实验结果

各步加样均应使用校准后的加样器，一次加样时间控制在5分钟内，样本数量多时推荐使用排枪加样

封板膜只限一次性使用，避免交叉污染

底物溶液需避光保存，避免强光照射

严格按照说明书操作，实验结果判定必须以酶标仪读数为准

所有样本、洗涤液和废弃物应按生物传染物处理

不同批号的试剂盒组分不得混用

若实验中使用的试剂产生大量泡沫，会导致加样误差，需避免剧烈振荡试剂

洗涤过程非常重要，不充分的洗涤易造成假阳性结果

储存条件

试剂盒未开封时：2-8℃避光保存

试剂盒开封后：

预包被微孔板：密封后2-8℃保存

标准品、生物素标记抗体、HRP标记亲和素：-20℃避光保存，避免反复冻融

其他试剂：2-8℃避光保存
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