大鼠载脂蛋白E(Apo-E)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）：

预包被抗大鼠Apo-E单克隆抗体于微孔板

加入样本或标准品，Apo-E与捕获抗体结合

加入生物素化检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物

添加链霉亲和素-HRP偶联物，结合生物素化抗体

加入TMB显色底物，催化产生蓝色产物

终止液终止反应，黄色深浅与Apo-E浓度正相关

检测范围

0.156 ng/mL - 10 ng/mL（高灵敏度版本可扩展至0.078 ng/mL）

样本类型

血清、血浆（肝素/EDTA抗凝）

脑脊液、组织匀浆液（需离心预处理）

细胞培养上清

注意：避免溶血、脂血样本，样本建议-80°C长期保存，避免反复冻融。

试剂盒组成

（96T规格）

| 组分 | 规格 | 储存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔（12条×8孔） | 2-8°C干燥保存 |

| 大鼠Apo-E标准品 | 冻干粉×2支 | -20°C避光 |

| 样本稀释液 | 30 mL | 2-8°C |

| 生物素化检测抗体 | 1.2 mL | -20°C |

| 链霉亲和素-HRP结合物 | 1.2 mL | -20°C避光 |

| TMB显色底物 | 15 mL | 2-8°C避光 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 15 mL | 2-8°C |

| 20×洗涤缓冲液（浓缩液） | 50 mL | 2-8°C |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

操作步骤

标准品重建：用1mL稀释液溶解冻干标准品，梯度稀释7个浓度

加样：每孔加入100μL标准品或样本（复孔实验）

孵育：37°C温育90分钟

洗板：用1×洗涤液洗板4次

加检测抗体：每孔100μL生物素化抗体，37°C孵育60分钟

加酶结合物：每孔100μL HRP-链霉亲和素，37°C孵育30分钟

显色：每孔90μL TMB，避光室温显色15分钟

终止：每孔50μL终止液，450nm波长读取OD值

计算结果

绘制标准曲线：以标准品浓度为横轴，OD₄₅₀nm值为纵轴（拟合4-参数逻辑曲线）

样本浓度 = 曲线对应值 × 稀释倍数

性能参数

精密度：板内变异系数(CV) < 8%，板间CV < 10%

回收率：血清样本85%-115%

特异性：不与大鼠Apo-A1、Apo-B等交叉反应

灵敏度：最低检出限(LOD) 0.05 ng/mL

注意事项

实验全程戴手套，避免酶标板污染

TMB与终止液有腐蚀性，避免接触皮肤

不同批次试剂组分不可混用

样本中勿添加叠氮钠（抑制HRP活性）
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