大鼠主要碱性蛋白(MBP)ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法。以大鼠MBP特异性抗体包被酶标板，样本中的MBP与包被抗体结合后，加入生物素化检测抗体形成复合物，再通过辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素与底物显色。显色强度与样本中MBP浓度成正比，通过标准曲线定量。

适用范围

适用于大鼠血清、血浆、脑脊液、细胞培养上清及组织匀浆等液体样本的MBP检测。

试剂盒组成

（2-8℃保存）

预包被酶标板：96孔

标准品（冻干粉）：200 ng/mL（需复溶后梯度稀释）

20×浓缩洗涤液：50 mL

样本稀释液：12 mL

酶标抗体工作液：12 mL

底物液（A/B）：各6 mL

终止液：6 mL

封板膜、说明书及密封袋

自备器材

37℃恒温孵育箱

450 nm滤光片酶标仪

精密移液器及一次性吸头

蒸馏水或去离子水

计时器、吸水纸

操作步骤

试剂准备

所有试剂室温平衡30分钟，20×洗涤液按1:19稀释为工作浓度。

标准品复溶后依次稀释为200、100、50、25、12.5、6.25 ng/mL。

加样

标准品孔：加入50 μL梯度标准品。

样本孔：先加10 μL样本，再加40 μL稀释液（5倍稀释）。

空白孔：仅加样本稀释液。

孵育与洗涤

37℃孵育60分钟，洗板5次，拍干。

每孔加入酶标抗体50 μL，37℃孵育30分钟，再次洗板。

显色与终止

加入底物A/B各50 μL，避光反应15分钟。

终止液50 μL/孔，立即测定450 nm OD值。

注意事项

避免反复冻融样本，离心去除沉淀。

加样时间控制在10分钟内，推荐使用多道移液器。

孵育时需覆盖湿盒或封板膜防止蒸发。

标准曲线需每次实验重新制备。

计算与结果

以标准品浓度为横坐标、OD值为纵坐标绘制曲线，通过样本OD值计算浓度。若样本浓度超出范围，需进一步稀释后复测。

有效期与储存

未开封试剂盒有效期为12个月，开封后组分按说明书要求保存。
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