大鼠总胆汁酸(TBA)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒用于定量检测大鼠生物样本（如血清、血浆、组织匀浆液）中的总胆汁酸（TBA）含量。适用于肝脏功能研究、胆汁淤积模型评价、药物肝毒性评估等科研领域。

检测原理

本试剂盒采用竞争性酶联免疫吸附法（Competitive ELISA）原理。微孔板预包被有特异性抗胆汁酸抗体（Anti-Bile Acid Antibody）。实验时，样本或标准品中的游离胆汁酸与加入的生物素标记胆汁酸（Biotinylated Bile Acid）竞争结合预包被在板上的抗体。经过洗涤去除未结合的物质后，加入辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（Streptavidin-HRP）。链霉亲和素会与生物素标记胆汁酸特异性结合。再次洗涤后，加入显色底物TMB（3,3',5,5'-四甲基联苯胺）。TMB在HRP的催化下转化为蓝色产物，加入终止液（Stop Solution）后颜色由蓝变黄。在特定波长（通常450nm，参考波长630nm）下测定吸光度（OD值）。样本或标准品中的胆汁酸浓度与测得的OD值呈负相关。通过绘制标准曲线，即可计算出样本中总胆汁酸的实际浓度。

试剂盒组分 (96T)

| 组分名称 | 规格 | 数量 | 保存条件 | 备注 |

| 预包被抗体板 | 96孔 | 1块 | 2-8°C | 微孔板已包被抗胆汁酸抗体 |

| 胆汁酸标准品 (Lyophilized) | - | 6-7瓶 | 2-8°C | 使用前按说明书要求用标准品稀释液复溶，浓度通常覆盖范围（如0, 1.56, 3.125, 6.25, 12.5, 25, 50, 100 µmol/L 或类似范围） |

| 标准品/样本稀释液 | 液体 | 1瓶 | 2-8°C | 用于复溶标准品和稀释样本 |

| 生物素标记胆汁酸 (Biotin-BA) | 液体 | 1瓶 | 2-8°C | 工作浓度，避光 |

| 生物素标记胆汁酸稀释液 | 液体 | 1瓶 | 2-8°C | 用于稀释Biotin-BA（如需要） |

| 辣根过氧化物酶-链霉亲和素 (SA-HRP) | 液体 | 1瓶 | 2-8°C | 工作浓度，避光 |

| SA-HRP稀释液 | 液体 | 1瓶 | 2-8°C | 用于稀释SA-HRP（如需要） |

| 洗涤缓冲液 (20X Concentrate) | 液体 | 1瓶 | 2-8°C | 使用前用去离子水或双蒸水稀释20倍 |

| 显色底物液 A (TMB A) | 液体 | 1瓶 | 2-8°C | 避光 |

| 显色底物液 B (TMB B) | 液体 | 1瓶 | 2-8°C | 避光 |

| 终止液 (Stop Solution) | 液体 | 1瓶 | 2-8°C | 通常为1M或2M硫酸（强酸，小心操作） |

| 封板膜 (Plate Sealer) | - | 3-4张 | 室温 | 用于孵育时覆盖微孔板 |

| 说明书 (Product Manual) | - | 1份 | - | - |

样本收集与处理

血清/血浆：

采集： 用标准方法采集大鼠血液。

血清：血液收集于不含抗凝剂的离心管中，室温静置30-60分钟凝固，或2-8°C静置2小时后，4°C，1000×g 离心20分钟，小心吸取上层淡黄色血清。

血浆：血液收集于含抗凝剂（推荐肝素锂/钠、EDTA、柠檬酸钠）的离心管中，轻柔颠倒混匀5-10次防止凝固。采血后30分钟内，4°C，1000×g 离心15分钟，小心吸取上层血浆。

避免溶血： 溶血会显著干扰检测结果。

存储： 如果样本不能立即检测，可分装保存于-20°C或-80°C冰箱。避免反复冻融（建议冻融不超过3次）。

使用前： 置于室温下解冻，轻轻混匀，避免剧烈震荡产生气泡。如有沉淀，4°C，1000×g 离心5分钟，取上清检测。严重脂血样本可能影响结果。

组织匀浆液：

取适量（如50-100mg）新鲜或速冻（-80°C）的大鼠组织（如肝脏），用预冷的PBS（pH 7.2-7.4）冲洗，吸干。

按重量（mg）:体积（μL）=1:9的比例加入预冷的PBS（或试剂盒指定的匀浆缓冲液）。

在冰浴条件下，用组织匀浆器充分研磨匀浆。

将匀浆液转移至离心管中，4°C，5000×g 离心10分钟。

小心吸取上清液用于检测。

分装保存于-20°C或-80°C，避免反复冻融。

细胞培养上清液：

收集细胞培养上清液，4°C，1000×g 离心10分钟去除细胞碎片。

取上清液直接检测或分装冻存（-20°C或-80°C）。

注意： 细胞培养上清液中可能含有较高浓度的干扰物质（如酚红、高浓度蛋白、生长因子等），使用前需确认试剂盒对该样本类型的适用性，必要时进行稀释或特殊处理。
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