大鼠组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA试剂盒

实验原理

本试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。预先包被大鼠TFPI特异性捕获抗体的微孔板中，依次加入待测样本、标准品及辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，经温育和充分洗涤后，加入底物TMB显色。TMB在HRP催化下转化为蓝色产物，酸化后变为黄色，其颜色深度与样本中TFPI浓度呈正相关。通过酶标仪测定450 nm波长下的吸光度（OD值），依据标准曲线计算样本浓度。

样本处理要求

血清：全血室温静置2小时或4℃过夜后，1000×g离心20分钟，分离上清；短期保存于-20℃，长期保存于-80℃，避免反复冻融。

血浆：需使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000×g离心30分钟取上清。

其他样本：细胞培养上清液、组织匀浆等需离心去除颗粒物，澄清后检测。

操作步骤

试剂准备：平衡所有组分至室温（20-25℃），标准品按说明书稀释。

加样：依次加入标准品、样本至对应微孔，每孔加入HRP标记抗体。

温育：37℃孵育60分钟，洗涤5次。

显色：每孔加入TMB底物，避光反应15分钟，终止液终止反应。

检测：450 nm波长读取OD值，绘制标准曲线并计算浓度。

技术参数

检测范围：根据标准品梯度设定（通常为0.1-10 ng/mL）。

灵敏度：最低检测限≤0.05 ng/mL。

特异性：与大鼠TFPI特异性结合，无交叉反应。

储存条件：未开封试剂盒-20℃保存（有效期6个月），开封后2-8℃保存（1个月内使用）。

注意事项

避免反复冻融样本或试剂。

不同批次试剂不可混用。

操作时需佩戴防护用具，避免接触终止液（含硫酸）。
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