检测原理

预包被板：微孔板预包被抗雌激素抗体。

竞争反应：

样本/标准品中的雌激素与生物素标记的雌激素抗原竞争结合抗体位点。

显色系统：

加入链霉亲和素-HRP → 催化TMB底物 → 蓝色显色 → 终止液（Stop Solution）变黄色。

定量分析：

颜色深度与雌激素浓度成反比（OD值越低，样本浓度越高）。

检测目标：人血清/血浆/细胞上清液中的雌激素（Estradiol, E1, E2, E3等，以试剂盒具体范围为准）

适用样本：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、组织匀浆液、细胞培养液

检测原理：竞争性ELISA（Competitive ELISA）

试剂盒组成

（96T示例）

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔（可拆卸）| 2-8°C |

| 雌激素标准品（0, 5, 15, 40, 100, 250 pg/mL） | 6管 x 1mL | -20°C（冻干粉需复溶） |

| 生物素标记抗原 | 1瓶 x 120μL | -20°C |

| 链霉亲和素-HRP | 1瓶 x 120μL | -20°C |

| 洗涤缓冲液（10x） | 1瓶 x 30mL | 2-8°C（稀释后2-8°C稳定1个月） |

| TMB底物液 | 1瓶 x 10mL | 2-8°C（避光）|

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶 x 10mL | 2-8°C |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本处理

| 样本类型 | 处理方式 |

| 血清 | 室温凝固30min → 离心2000×g 15min → 取上清 |

| 血浆 | 抗凝全血离心2000×g 15min → 取上清（避免反复冻融³） |

| 细胞上清 | 离心去除杂质 → 直接检测或-80°C保存 |

| 组织匀浆 | 按质量加入PBS（1:9 w/v） → 匀浆 → 离心10000×g 10min → 取上清 |

注意：避免使用溶血、高脂血样本。样本-80°C可保存3个月，避免反复冻融＞3次。

操作步骤

（25℃室温环境）

试剂准备：

标准品复溶：用去离子水/样本稀释液溶解冻干粉。

洗涤缓冲液：1份10x洗液 + 9份去离子水稀释。

加样：

设空白孔（仅加稀释液）、标准品孔、样本孔。

每孔加50μL标准品/样本 → 加50μL生物素标记抗原 → 封板膜覆盖 → 37°C孵育60min。

洗涤：

弃液 → 每孔加300μL洗液 → 静置30s → 弃液（重复5次）。

酶反应：

每孔加100μL链霉亲和素-HRP → 37°C孵育30min → 重复洗涤5次。

显色：

加90μL TMB底物 → 避光孵育15-20min（蓝色显色）。

终止与读数：

加90μL终止液 → 颜色变黄 → 30min内用酶标仪读取450nm处OD值（参考波长630nm）。

数据分析

标准曲线绘制：

计算标准品平均OD值 → 以标准品浓度为横坐标（对数），OD值为纵坐标（线性）。

样本计算：

根据样本OD值，从标准曲线计算雌激素浓度（pg/mL）。

稀释样本：浓度×稀释倍数。

典型标准曲线范围：5–250 pg/mL（不同试剂盒有差异）

灵敏度（最低检测限）：通常≤1.5 pg/mL（以标准品最低点80% B/B0计）

技术参数

| 指标 | 值 |

| 检测范围 | 1.56–100 pg/mL（示例） |

| 批内精密度（CV） | ≤8% |

| 批间精密度（CV） | ≤12% |

| 特异性 | 不与皮质醇、孕酮交叉反应（>0.01%） |

| 回收率 | 85%-115%（血清样本验证） |

| 稳定性 | 未开封试剂盒：2-8°C保存6个月；开封后按组分要求保存 |

注意事项

操作防护：

终止液含硫酸，避免接触皮肤；TMB有潜在致敏性，需戴手套操作。

关键步骤：

洗涤需彻底（残留液体会导致高背景）；孵育时间/温度严格一致。

样本干扰：

血样本中因子（RF）＞50 IU/mL或溶血（血红蛋白＞0.5 mg/mL）可能导致假阳性。

数据异常处理：

标准曲线R²＜0.95 → 重复实验；样本值超出范围 → 用稀释液稀释后重测。

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