试剂盒基本原理

采用双抗体夹心ELISA法：

用纯化的人促睡眠肽(DSIP)抗体包被微孔板形成固相抗体，加入样本后，若存在DSIP则与固相抗体结合；

再加入HRP标记的检测抗体，形成“抗体-抗原-酶标抗体”复合物，经洗涤后加底物TMB显色；

颜色深浅与样本中DSIP含量呈正相关，450nm波长测定OD值计算浓度。

核心性能参数

参数 指标

灵敏度 最低检测浓度＜1号标准品（部分产品可达pg级）

特异性 不与其他细胞因子或结构类似物交叉反应

重复性 板内CV＜9%，板间CV＜11%

检测范围 0-2000 pg/ml

保存条件 2-8℃避光保存，有效期6个月

样本处理要求

血清/血浆：

血清：1000×g离心10分钟分离上清；

血浆：EDTA/柠檬酸盐/肝素抗凝，1000×g离心30分钟取上清。

组织匀浆/细胞上清：

组织匀浆：加生理盐水捣碎后1000×g离心10分钟取上清；

细胞上清：离心10分钟去除颗粒。

特殊处理：

血浆样本可加酶抑制剂（如抑肽酶）或酸化处理（1ml血浆+0.2ml 1mol/L HCl）；

样本需分装-80℃冻存，避免反复冻融，解冻后充分混匀。

操作流程

试剂准备：

试剂盒室温平衡20分钟，浓缩洗涤液按1:20或1:30稀释。

加样与温育：

标准品孔加50μL梯度标准品（如2000、1000、500 pg/ml等），样本孔加10μL样本+40μL稀释液（1:5稀释）；

每孔加50μL生物素标记抗体，37℃温育60分钟。

洗板与显色：

洗涤5次（每孔加满洗涤液，静置30秒后拍干）；加底物A、B各50μL，37℃避光孵育10-15分钟。

终止与读数：

加终止液50μL，15分钟内450nm测定OD值，结果需乘以稀释倍数。

注意事项

试剂安全：底物B对光敏感需避光保存，避免接触终止液和底物，操作时戴手套。

操作规范：

标准品需现配现用，稀释时充分振荡混匀；

不用的板条立即放回包装袋密封，4℃可保存1个月；

加样顺序和温育时间需严格一致，确保实验平行性。

样本禁忌：溶血或高血脂样本可能干扰结果，检测前需离心去除沉淀。

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