人γ肽(Pγ)ELISA试剂盒

预期用途

本试剂盒用于定量检测人血清、血浆（EDTA/肝素/柠檬酸盐抗凝）或其他生物液体（如细胞培养上清、尿液，需验证适用性）中**人γ肽（Pγ）**的浓度。适用于科研用途，不作为临床诊断依据。

检测原理

预包被抗体： 微孔板孔内预先包被了抗人Pγ的捕获抗体。

样本/标准品加入： 加入待测样本或Pγ标准品，孔内的Pγ会被捕获抗体结合。

洗涤： 去除未结合物质。

生物素标记抗体加入： 加入生物素标记的抗人Pγ检测抗体，与已结合的Pγ形成“夹心”复合物。

洗涤： 再次去除未结合物质。

酶结合物加入： 加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素（Streptavidin），生物素-链霉亲和素特异性结合。

洗涤： 去除未结合的酶结合物。

底物加入： 加入显色底物（TMB）。

终止反应： 加入酸性终止液。

读数： 在特定波长（如450nm，参考波长570nm或630nm）下检测吸光度（OD值）。OD值与样本中Pγ浓度呈正相关。

样本收集与处理

血清： 室温静置凝血约30分钟，1500×g离心15分钟，小心吸取上清液。立即检测或分装冻存于 -20°C/-70°C。

血浆： 使用EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝管。采集后30分钟内，1500×g离心15分钟，收集上清。立即检测或分装冻存于 -20°C/-70°C。避免使用溶血、脂血或高粘稠度样本。

细胞培养上清： 离心去除细胞及碎片，取上清检测或冻存。

尿液/其他体液： 可能需要特殊处理（如离心）。请查阅具体文献或按厂商建议处理。

冻融： 样本应尽可能避免反复冻融。融解时需轻柔混匀，确保完全融解并在冰上操作。

稀释： 某些样本（如血清）可能需按说明书用提供的样本稀释液进行预稀释，使检测值落在标准曲线范围内。稀释倍数需记录！

操作步骤

准备：

提前取出试剂盒，平衡至室温（约30分钟）。

充分混匀各液体试剂。

将洗涤缓冲液浓缩液按比例（如1：19）用蒸馏水稀释成工作液（1x）。

按要求稀释标准品、生物素检测抗体、SA-HRP。

加样：

设复孔（至少2孔）。

加入标准品（不同浓度）和待测样本（通常是100μL/孔）到相应孔中。

设空白孔（只加试剂或缓冲液，不加样本或标准品/抗体）。

孵育： 用封板膜盖板，37°C 恒温孵育规定时间（如60-120分钟）。

洗涤： 弃孔内液体，用稀释好的洗涤工作液每孔至少加300μL洗板（自动洗板机或手动洗瓶）。重复3-5次。最后一次在吸水纸上拍干。

加生物素检测抗体： 每孔加入稀释好的生物素标记检测抗体（100μL）。

孵育、洗涤： 同步骤3、4。

加SA-HRP： 每孔加入稀释好的SA-HRP溶液（100μL）。

孵育、洗涤： 同步骤3、4。

加底物TMB： 避光操作，每孔加入TMB溶液（90μL）。

避光显色： 室温避光孵育规定时间（如15-30分钟）。观察颜色变化（蓝色）。

终止反应： 每孔加入终止液（50μL或90μL，按说明书）。颜色由蓝变黄。

读数： 在加入终止液后10-30分钟内，使用酶标仪在450nm主波长下读取吸光度（OD值）。如有条件，设定570nm或630nm作为参考波长进行校正（扣除非特异性背景）。

典型性能参数

| 参数 | 典型值 |

| 检测范围 | 1.0 - 500 pg/mL |

| 灵敏度 (最低检测限) | < 0.5 pg/mL |

| 精密度 (批内变异 CV%) | < 8% |

| 精密度 (批间变异 CV%) | < 12% |

| 回收率 | 85% - 115% |

| 特异性 | 与人其它类似物无显著交叉反应 |

| 线性稀释 | 80% - 120% |

注意事项

严格遵守说明书： 操作前务必仔细、完整阅读官方说明书。

有效期： 使用在有效期内的试剂盒和组分。

交叉污染： 使用不同规格的吸头加不同试剂和样本。避免试剂瓶盖混用。

温度控制： 孵育温度和时间需准确控制。

洗涤彻底： 洗涤是ELISA成败的关键步骤之一，确保孔内无残留。

精准移液： 使用校准好的移液器和吸头。

TMB防护： TMB有潜在致癌性，避免接触皮肤、眼睛，避免氧化污染。

终止液酸性： 终止液为强酸，避免接触皮肤、衣物。如不慎接触，立即用大量清水冲洗。

质量控制： 强烈建议每次实验使用阳性质控品和阴性质控品监控实验有效性。

废物处理： 所有接触过生物样本、试剂的废弃物均应按生物危害废物处理规定处置。

数据解读： 结果仅限科研参考。
公司正在出售的产品