人吖啶橙(AO)ELISA试剂盒

产品概述

该试剂盒主要用于科研领域，用于测定人血清、血浆、细胞培养上清液或组织匀浆中吖啶橙（Acridine Orange, AO）的含量。

核心原理：竞争法（Competitive ELISA）

由于吖啶橙属于小分子，通常采用竞争法原理：

竞争结合：微孔板中包被了抗原（吖啶橙类似物）。样本中的游离吖啶橙与HRP标记的吖啶橙抗体竞争结合包被抗原的位点。

显色：加入底物TMB。

检测：颜色的深浅与样本中吖啶橙的浓度呈反比（即样本中AO越多，结合上去的酶标抗体越少，颜色越浅）。

试剂盒组成

组分名称 规格 (以96T为例) 保存条件

酶标包被板 96孔 (12孔×8条) 2-8℃保存

标准品 6管 (不同浓度梯度) 2-8℃保存

酶标试剂 (HRP标记抗体) 6ml - 10ml 2-8℃保存

样品稀释液 6ml 2-8℃保存

浓缩洗涤液 20× 或 30× 浓缩液 2-8℃保存

显色剂 A & B 各6ml 2-8℃，避光

终止液 6ml (2M H₂SO₄) 2-8℃保存

封板膜 2张 室温

样本处理与保存

血清/血浆：

按常规方法采集血液，离心取上清。

若样本中吖啶橙浓度过高，需用样品稀释液进行适当稀释。

组织/细胞：

加入适量生理盐水或提取液进行匀浆。

离心取上清用于检测。

注意事项：

避免干扰：由于吖啶橙本身是染料，样本若带有深颜色可能会干扰比色测定，建议设置空白对照调零。

保存：样本若不立即检测，应分装后于-20℃保存，避免反复冻融。

操作步骤

平衡：试剂盒从冰箱取出，平衡至室温（约15-30分钟）。

配液：洗涤液按比例稀释（如有结晶需37℃水浴溶解）。

加样：

设定标准品孔（加入不同浓度标准品）。

样本孔加入待测样本。

注意：竞争法通常需要先加标准品/样本，再加酶标抗体。

温育：37℃温育30-60分钟（具体时间视说明书而定）。

洗涤：弃去孔内液体，洗涤液注满每孔，静置30秒后弃去，重复5次，拍干。

显色：每孔加入显色剂A、B各50μL，37℃避光显色10-15分钟。

终止：每孔加入终止液50μL（溶液由蓝变黄）。

读数：在450nm波长处测定吸光度（OD值）。

注意事项

结果解读：因为是竞争法，标准曲线通常是一条下降的曲线（负相关）。计算浓度时请务必使用对应的拟合曲线软件或Excel公式，不要直接目测。

避光操作：吖啶橙本身是荧光染料，且底物TMB对光敏感，整个实验过程（特别是显色阶段）必须避光进行。

安全防护：

吖啶橙是一种诱变剂，具有一定的毒性。

终止液通常是强酸（如2M硫酸）。

操作时请务必佩戴手套、口罩和护目镜，在通风橱中处理高浓度原液。

洗涤彻底：洗板不彻底会导致非特异性结合，背景过高。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线（通常为四参数逻辑拟合）。根据样本的OD值在标准曲线上查出对应的浓度，最后乘以样本的稀释倍数。
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