人阿黑皮素原(POMC)ELISA试剂盒

检测原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）：

预包被抗人POMC单抗于微孔板。

加入样本/标准品，POMC抗原与包被抗体结合。

加入生物素标记抗人POMC二抗，形成抗体-抗原-抗体复合物。

加入辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素。

加入TMB底物显色，终止后测定450nm吸光度（OD值），POMC浓度与OD值正相关。

检测指标

靶标蛋白: 人阿黑皮素原（Proopiomelanocortin, POMC）

检测样本类型:

血清、血浆（肝素/EDTA抗凝）、细胞培养上清、组织匀浆液

注: 避免使用溶血或高脂样本。

试剂盒组分（以96孔板为例）

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔（12条×8孔） | 2-8℃（干燥） |

| POMC标准品 | 2瓶（浓度梯度冻干粉） | -20℃（复溶后2-8℃保存≤1周） |

| 生物素化抗体 | 1瓶（120μL） | -20℃ |

| HRP标记链霉亲和素 | 1瓶（120μL） | -20℃（避光） |

| 样本稀释液 | 1瓶（20mL） | 2-8℃ |

| TMB底物 | 1瓶（12mL） | 2-8℃（避光） |

| 终止液 | 1瓶（12mL, 2M H₂SO₄） | 2-8℃ |

| 洗涤缓冲液（20×） | 1瓶（30mL） | 2-8℃（稀释后2-8℃≤1月） |

| 封板膜 | 4张 | 室温 |

样本处理方法

| 样本类型 | 预处理要求 |

| 血清/血浆 | 离心去除颗粒，避免反复冻融（推荐分装储存在-80℃）。 |

| 细胞培养上清 | 离心去除杂质，直接检测或-80℃保存。 |

| 组织匀浆 | 按重量（g）:体积（mL）=1:5-10加入PBS均质，离心取上清。 |

标准曲线范围

典型范围: 0.156-10 ng/mL（实际范围以为准）

灵敏度: ≤0.05 ng/mL（最低检测限）

回收率: 85-115% | 批内/批间差异: CV < 10%

实验操作步骤

标准品/样本加样: 每孔加入100μL标准品或样本，37℃孵育90分钟。

洗涤: 甩去液体，用1×洗涤缓冲液洗3次（每次30秒）。

加生物素化抗体: 每孔100μL，37℃孵育60分钟。

洗涤: 同步骤2。

加HRP-链霉亲和素: 每孔100μL，37℃避光孵育30分钟。

洗涤: 同步骤2。

显色: 每孔加90μL TMB底物，37℃避光孵育15-20分钟（显蓝色）。

终止: 每孔加50μL终止液（变黄色）。

读值: 450nm波长测定OD值（建议630nm作参比波长）。

结果计算

计算标准品平均OD值，绘制浓度-OD值标准曲线（推荐四参数拟合）。

根据样本OD值从曲线计算POMC浓度。

示例:

样本OD值 = 0.85 → 标准曲线对应浓度 = 4.2 ng/mL

注意事项

关键提示:

所有试剂使用前平衡至室温（20-25℃）。

TMB底物对光敏感，需避光操作。

避免孔间交叉污染，更换吸头。

精密度要求高的实验需做复孔检测。

样本POMC浓度过高时需使用稀释液稀释（计算结果乘以稀释倍数）。

临床应用与意义

POMC是垂体前叶分泌的前体蛋白，可裂解为ACTH、β-内啡肽、α-MSH等激素：

诊断价值：

库欣综合征（ACTH依赖性 vs. 非依赖性）

阿狄森病（原发性肾上腺功能减退）

肥胖症（POMC基因突变相关性研究）

研究价值：

应激反应机制

皮肤色素调控

储存与有效期

未开封试剂盒: 2-8℃保存 ≤ 12个月（避免冻结）。

开封后试剂: 按组分说明储存（如生物素化抗体、HRP试剂需-20℃冻存）。
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