人癌胚铁蛋白(CEF) ELISA试剂盒

检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法：

抗人CEF单克隆抗体预包被于酶标板上。

加入样本或标准品，其中的CEF与包被抗体结合。

加入生物素标记的抗人CEF二抗，形成“抗体-抗原-二抗”复合物。

加入链霉素亲和素-HRP（辣根过氧化物酶），与生物素特异性结合。

加入TMB显色底物，在HRP催化下产生蓝色产物，终止液（酸性）作用后转为黄色。

吸光度（OD值）与样本中CEF浓度成正比。

检测方法： 双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）

适用样本类型： 血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆液

储存条件： 2–8°C 避光保存（有效期见外包装）

检测波长： 450 nm（参考波长 630 nm）

试剂盒组分

| 组分 | 规格（96孔） | 状态 |

| 预包被酶标板 | 96孔 | 干燥 |

| CEF标准品（0, 5, 10, 20, 50, 100 ng/mL） | 6管 x 1 mL | 冻干品（临用前复溶） |

| 样本稀释液 | 1瓶 x 20 mL | 液体 |

| 生物素标记抗CEF抗体 | 1瓶 x 120 μL | 液体 |

| 链霉素亲和素-HRP | 1瓶 x 120 μL | 液体 |

| TMB显色底物 | 1瓶 x 10 mL | 避光液体 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶 x 10 mL | 液体 |

| 洗涤缓冲液（20×浓缩液） | 1瓶 x 30 mL | 临用前稀释 |

| 封板膜 | 4张 | - |

样本处理

血清/血浆：全血室温静置30分钟→离心（2000 rpm, 10分钟）→取上清。建议稀释10倍后检测。

细胞上清：离心去除杂质，直接检测或适当稀释。

组织匀浆：取100 mg组织+1 mL PBS均质→离心（10,000 rpm, 5分钟）→取上清。

注意：避免样本反复冻融，检测前置于-20°C保存。

操作步骤

标准品复溶：用样本稀释液稀释至标定浓度。

加样：每孔分别加入标准品/样本100 μL（设复孔），37°C孵育60分钟。

洗涤：弃液→每孔加300 μL洗涤液（1×稀释）→静置30秒→弃液（重复3次）。

加生物素二抗：每孔100 μL→37°C孵育30分钟→重复洗涤3次。

加链霉素亲和素-HRP：每孔100 μL→37°C避光孵育20分钟→重复洗涤5次。

显色：每孔加TMB底物90 μL→37°C避光显色15分钟。

终止：每孔加终止液50 μL，立即检测OD值（30分钟内）。

结果计算

以标准品浓度（ng/mL）为横坐标，OD₄₅₀值为纵坐标，拟合标准曲线（四参数逻辑回归）。

将样本OD值代入曲线方程，计算浓度（ng/mL）。

检测范围：2–100 ng/mL

灵敏度：0.5 ng/mL（最低检出限）

批内变异：<8%；批间变异：<10%

注意事项

试剂使用前平衡至室温（25°C）。

TMB显色时间需根据实验条件优化（显色过深可能导致读数饱和）。

若样本浓度高于标准曲线，用稀释液适当稀释后重测。

本试剂仅用于科研，不适用于临床诊断。
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