人白介素3(IL-3)ELISA试剂盒

预期用途

定量检测人血清、血浆或细胞培养上清等样本中的IL-3浓度，仅限科研使用，不可用于临床诊断。

检测原理

采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）。将抗人IL-3单克隆抗体预包被于酶标板孔，加入待测样本或标准品后，IL-3与固相抗体结合；洗涤后加入生物素标记的检测抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物；再通过HRP标记的链霉亲和素与TMB底物显色，颜色深度与样本中IL-3浓度呈正相关，450nm波长下测定吸光度（OD值）并计算浓度。

试剂盒组成

预包被酶标板：96孔（12孔×8条）

标准品（冻干粉）：浓度范围通常为15.6-1000 pg/mL，需按说明书复溶

样本稀释液：3 mL

生物素标记抗体：1.5 mL

HRP标记链霉亲和素：1.5 mL

洗涤缓冲液（20×）：20 mL（使用前需稀释）

TMB显色液：A液、B液各3 mL

终止液：3 mL（2M硫酸）

封板膜/密封袋：2张

操作步骤

样本准备：血清/血浆需离心去除颗粒物，细胞上清需过滤。

标准品稀释：按梯度稀释至工作浓度。

加样：每孔加入标准品或样本100 μL，37℃孵育90分钟。

洗涤：弃液后每孔加洗涤液300 μL，重复3次。

加检测抗体：每孔加入生物素化抗体100 μL，37℃孵育60分钟。

加酶结合物：每孔加入HRP标记物100 μL，37℃避光孵育30分钟。

显色：加入TMB底物100 μL，室温避光显色15分钟。

终止与检测：加终止液50 μL，立即于450nm测OD值。

注意事项

储存条件：未开封试剂盒-20℃保存（有效期6个月）；开封后酶标板需密封防潮，2-8℃保存。

样本要求：避免反复冻融，溶血或脂血样本可能影响结果。

质量控制：建议标准品及样本做复孔检测，CV值应＜15%。

交叉污染：使用一次性吸头，避免酶标板干燥。

结果计算

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过四参数拟合方程计算样本浓度。若样本OD值超出标准曲线范围，需适当稀释后重测。
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