人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒

检测原理

采用 双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA）：

预包被抗人IL-8单抗于酶标板孔内。

加入样本/标准品，IL-8被捕获抗体结合。

加入生物素标记的抗人IL-8检测抗体，形成“抗体-抗原-抗体”复合物。

加入辣根过氧化物酶（HRP）标记链霉亲和素（Streptavidin）。

加入显色底物（TMB），HRP催化显色反应，终止液终止。

450 nm波长测定吸光度（OD值），OD值与IL-8浓度成正比。

检测范围

标准曲线范围：15.6 pg/mL – 1000 pg/mL

最低检测限：< 5.0 pg/mL（灵敏度）

样本类型适用性：

✔️ 血清 ✔️ 血浆（EDTA/肝素抗凝） ✔️ 细胞培养上清 ✔️ 组织匀浆液

试剂盒组分

| 组分（2–8°C保存） | 规格 | 数量 |

| 预包被IL-8抗体酶标板 | 96孔 | 1块 |

| 重组人IL-8标准品 | 冻干粉/液体 | 2支 |

| 生物素标记抗人IL-8抗体 | 120 µL | 1瓶 |

| HRP-链霉亲和素（SABC） | 120 µL | 1瓶 |

| 洗涤缓冲液（20×） | 30 mL | 1瓶 |

| TMB显色液 | 10 mL | 1瓶 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 10 mL | 1瓶 |

| 封板膜 | - | 4张 |

| 说明书 | - | 1份 |

注：**使用前需复溶标准品并按说明书稀释；所有液体组分恢复至室温后使用。

样本准备

血清/血浆：离心去除颗粒物（3000 rpm × 10 min），避免溶血。

细胞上清：离心除去细胞碎片（12000 rpm × 5 min）。

组织匀浆：用PBS匀浆，离心取上清（>5000×g）。

建议：样本于-20°C/-80°C分装冻存，避免反复冻融；检测前室温平衡。

操作步骤

实验前准备：

配1×洗涤液：20×洗液 + 双蒸水按1:19稀释备用。

标准品梯度稀释：用标准品稀释液配7个浓度点（1000 → 15.6 pg/mL）。

样本按预计浓度稀释（通常5-100倍）。

检测流程（室温，避光）：

加样：

空白孔：双蒸水/稀释液

标准品孔：50 µL/孔

样本孔：50 µL/孔

→ 覆膜，37°C孵育90分钟。

洗板：吸去液体，洗液注满孔→静置30秒→吸干（重复3次）。

加检测抗体：每孔加50 µL生物素化抗体 → 37°C孵育60分钟 → 洗板3次。

加SABC：每孔加50 µL HRP-链霉亲和素 → 37°C孵育30分钟 → 洗板5次。

显色：每孔加90 µL TMB → 37°C避光孵育15–20分钟（显蓝色）。

终止：每孔加50 µL终止液（黄色）。

读值：30分钟内于450 nm测OD值（参考630 nm校准）。

结果计算

绘制标准曲线（以标准品浓度 vs OD值）。

使用四参数拟合（4-PL）或双对数曲线计算样本IL-8浓度。

公式：

样本浓度（pg/mL）= 曲线读数 × 稀释倍数

示例：使用1:10稀释的血清样本，曲线值为80 pg/mL，则实际浓度 = 80 × 10 = 800 pg/mL。

注意事项

质量控制：

空白孔OD值应 ≤ 0.08。

最高浓度标准品（1000 pg/mL）OD值应 > 1.0。

板内/板间变异系数（CV）＜10%。

安全警示：

终止液含硫酸，避免接触皮肤；TMB为致癌物，需戴手套操作。

试剂含叠氮钠（NaN₃），禁用含HRP的金属容器。

性能参数：

特异性：不与IL-1β、TNF-α、MCP-1等交叉反应。

回收率：85–115%（样本加标测试）。

精密度：批内CV < 8%，批间CV < 12%。
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