人白三烯B4(LTB4) ELISA试剂盒

检测原理

采用竞争性酶标免疫分析法：

样本或标准品中的LTB4与预包被在微孔板上的LTB4抗原竞争结合生物素标记的抗LTB4抗体。

加入HRP标记的链霉亲和素，与生物素结合。

加入显色底物TMB，显色强度与样本中LTB4浓度呈负相关。

样本类型

推荐：细胞培养上清液、血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、组织匀浆液（需预处理）。

禁忌：溶血或脂血样本（可能导致假阳性）。

试剂盒组分（96T示例）

| 组分 | 规格 | 储存条件 |

| LTB4预包被微孔板 | 1块（12条×8孔） | 2-8°C（干燥避光） |

| LTB4标准品（5ng/mL） | 1管（冻干粉） | -20°C |

| 生物素标记抗LTB4抗体 | 1瓶（120μL） | -20°C |

| HRP-链霉亲和素 | 1瓶（120μL） | -20°C |

| TMB显色液 | 1瓶（10mL） | 避光2-8°C |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10mL） | 2-30°C |

| 洗涤液（25×浓缩液） | 1瓶（30mL） | 2-8°C |

操作步骤

样本前处理：

血清/血浆：离心去除沉淀，直接检测（避免反复冻融）。

细胞培养液：1500×g离心10分钟，取上清。

组织：加入PBS匀浆后离心，取上清。

标准品复溶：用1mL去离子水溶解冻干粉，梯度稀释至0~5ng/mL。

加样：50μL标准品/样本 + 50μL生物素抗体 → 37°C孵育1小时。

洗涤：洗板3次（每孔300μL 1×洗涤液）。

加酶：每孔100μL HRP-链霉亲和素 → 37°C孵育30分钟。

显色：每孔90μL TMB → 避光37°C显色15分钟。

终止：每孔50μL终止液 → 450nm波长读OD值。

结果计算

绘制标准曲线：以标准品浓度（ng/mL）为X轴，B/B₀%（标准品OD值/0浓度OD值×100%）为Y轴。

四参数曲线拟合（推荐）或对数坐标线性拟合。

样本浓度通过曲线反推，乘以稀释倍数（若适用）。

关键参数

| 指标 | 性能 |

| 灵敏度 | 6.3 pg/mL（最低检测限） |

| 检测范围 | 15.6~1000 pg/mL |

| 精密度 | 板内CV < 10%，板间CV < 15% |

| 特异性 | 与LTB₅交叉反应 < 0.01%，其他白三烯无交叉 |

| 回收率 | 血清样本：85~110% |

注意事项

核心操作要求：

避免反复冻融试剂（抗体/标准品分装保存）。

洗涤液需用去离子水稀释至1×。

显色时间严格控制在10~15分钟（依室温调整）。

读板前擦干孔板底部水渍。
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