预期用途

本试剂盒用于定量检测人血清、血浆、细胞培养上清液、组织匀浆液等样本中的弹性蛋白酶（Elastase）浓度。适用于疾病机制研究、炎症标志物检测、药物疗效评估等科研领域。

检测原理

采用双抗体夹心法：

预包被：96孔板预先包被抗人弹性蛋白酶单克隆抗体（捕获抗体）。

样本结合：待测样本中的弹性蛋白酶与捕获抗体结合。

检测抗体：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体，形成抗体-抗原-抗体复合物。

显色反应：加入TMB底物，HRP催化产生蓝色产物。

终止与测定：加入终止液变黄色，450nm波长下测吸光度（OD值），浓度与OD值呈正相关。

试剂盒组分

| 组分 | 规格 | 保存条件 |

| 预包被微孔板 | 96孔（8孔×12条） | 2-8°C |

| 弹性蛋白酶标准品 | 6管（0-500 pg/mL梯度） | -20°C |

| HRP标记检测抗体 | 1管（120 μL） | -20°C |

| TMB底物溶液 | 1瓶（10 mL） | 避光2-8°C |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 1瓶（10 mL） | 室温 |

| 洗涤缓冲液（25×） | 1瓶（30 mL） | 2-8°C |

| 样本稀释液 | 1瓶（20 mL） | 2-8°C |

样本要求

血清/血浆：采集后离心去除颗粒，避免溶血。短期存放于2-8°C（<24小时），长期保存需-20°C或-80°C。

细胞培养液：直接离心取上清液。

组织样本：用PBS匀浆后离心取上清。

稀释建议：初始样本建议2-5倍稀释，高浓度样本需进一步稀释（用样本稀释液）。

操作步骤

试剂准备：将洗涤缓冲液按1:25稀释成工作液。标准品梯度稀释（0, 15.6, 31.2, 62.5, 125, 250, 500 pg/mL）。

加样：

标准品/样本各100 μL加入微孔，复孔设置避免边缘效应。

37°C孵育90分钟。

洗涤：弃液，每孔加洗涤液300 μL，洗3次。

加检测抗体：每孔加100 μL HRP检测抗体，37°C孵育60分钟。

洗涤：同步骤3（洗5次）。

显色：每孔加TMB 90 μL，避光37°C孵育15-20分钟。

终止：每孔加终止液50 μL，颜色由蓝转黄。

检测：30分钟内用酶标仪测450 nm吸光度（参考波长630 nm）。

结果计算

计算标准孔OD值的平均值。

以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线（四参数拟合）。

根据样本OD值代入曲线方程，乘以稀释倍数，得到实际浓度（pg/mL）。

典型标准曲线范围：15.6~500 pg/mL

检测限（LOD）：≤5 pg/mL

灵敏度（最低检测浓度）：<10 pg/mL

性能参数

| 指标 | 值 |

| 精密度 | 板内CV < 8%，板间CV < 12% |

| 回收率 | 85-115% |

| 特异性 | 不与人Cathepsin G、蛋白酶3等交叉反应 |

| 线性范围 | 样本稀释后浓度在标准曲线范围内线性良好（R²≥0.99） |

注意事项

关键提示：

避免反复冻融样本和试剂。

TMB底物对光敏感，需避光保存。

终止液为强酸，操作时佩戴防护用具。

不同批次试剂盒组分不可混用。

保存与有效期

未开封试剂盒：-20°C保存，有效期12个月。

开封后：预包被板条密封后2-8°C保存（1个月内使用），其他组分按说明保存。

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